Sự khác biệt chính giữa nhuộm Coomassie và nhuộm bạc là nhuộm coomassie là kỹ thuật nhuộm protein sử dụng màu xanh lam rực rỡ coomassie, trong khi nhuộm cúi là kỹ thuật nhuộm protein sử dụng vết bạc.
Tách và xác định protein là các bước quan trọng trong phân tích proteome. Chúng cần xác định đặc tính protein có độ phân giải cao sau khi điện di trên gel. Có rất nhiều kỹ thuật nhuộm bao gồm các vết bẩn khác nhau như thuốc nhuộm anion (xanh lam sáng màu coomassie), cation kim loại (imidazole-kẽm), nhuộm bạc và nhuộm huỳnh quang, v.v. Đôi khi, cũng có thể sử dụng đầu dò phóng xạ. Việc lựa chọn kỹ thuật nhuộm phụ thuộc vào sự đơn giản, sự sẵn có của thiết bị hình ảnh trong phòng thí nghiệm, v.v.
Nhuộm Coomassie là gì?
Coomassie nhuộm là một kỹ thuật nhuộm protein sử dụng một màu xanh lam rực rỡ coomassie. Nó thường được gọi là kỹ thuật xanh coomassie. Coomassie màu xanh lam rực rỡ là thuốc nhuộm protein anion phổ biến nhất. Vết này thường nhuộm hầu hết tất cả các protein có độ tuyến tính định lượng tốt ở độ nhạy trung bình. Vết màu xanh lam rực rỡ Coomassie liên kết không đặc hiệu với hầu hết tất cả các protein. Có hai biến thể màu xanh lam rực rỡ coomassie khác nhau: R-250 và G-250. R-250 cung cấp thời gian nhuộm màu ngắn hơn, trong khi G-250 có sẵn trong các công thức nhạy cảm hơn và thân thiện với môi trường.
Hình 01: Nhuộm Coomassie
Thuốc nhuộmCoomassie rất phổ biến trong các nghiên cứu khối phổ và nghiên cứu xác định protein. Hơn nữa, vết coomassie an toàn sinh học là một công thức không nguy hiểm của coomassie blue G-250 hiện đang có mặt trên thị trường. Ưu điểm của công thức này là nó chỉ cần nước để rửa và khử mùi. Vết coomassie an toàn sinh học mang lại độ nhạy tương đương với vết coomassie blue G-250 thông thường nhưng tốt hơn vết coomassie R-250. Hơn nữa, nó có quy trình nhuộm đơn giản và nhanh chóng hơn so với Coomassie blue G-250 thông thường. Hạn chế của nhuộm xanh coomassie là nó kém nhạy hơn so với nhuộm bạc. Màu xanh lam coomassie có độ nhạy thấp hơn màu bạc khoảng 50 lần. Tuy nhiên, do tính đơn giản trong việc ràng buộc, nó được ưu tiên sử dụng trong nhiều nghiên cứu.
Nhuộm Bạc là gì?
Nhuộm màu bạc là một kỹ thuật nhuộm màu protein sử dụng một chất nhuộm màu bạc. Nhuộm bạc được sử dụng để nhuộm cả gel agarose và polyacrylamide. Phương pháp nhuộm bạc của protein trong gel agarose lần đầu tiên được phát triển vào năm 1973 bởi Kerenyi và Gallyas. Sau đó, nó được điều chỉnh cho các protein trong gel polyacrylamide được sử dụng trong SDS-PAGE. Hiện nay, phương pháp nhuộm bạc còn được dùng để nhuộm DNA hoặc RNA. Để tẩy ố các gel, các gel được ủ với dung dịch bạc nitrat trong phương pháp này. Nhuộm bạc làm ố các vị trí có protein từ nâu đến đen.
Hình 02: Nhuộm bạc
Cường độ của màu bạc phụ thuộc vào cấu trúc cơ bản của protein. Hơn nữa, độ sạch của bình được sử dụng và độ tinh khiết của thuốc thử cũng có thể ảnh hưởng đến chất lượng bạc nhuộm. Tuy nhiên, hạn chế của phương pháp nhuộm bạc là không thể phát hiện tất cả các protein, đặc biệt là glycoprotein và protein có các nhóm biến đổi lớn gắn vào chuỗi bên của chúng.
Điểm giống nhau giữa Coomassie và Bạc ố là gì?
- Coomassie và nhuộm bạc là hai kỹ thuật được sử dụng trong nhuộm protein.
- Chúng có thể nhuộm cả protein và DNA.
- Cả hai kỹ thuật nhuộm đều có nhược điểm.
- Các kỹ thuật này có các bước tương tự nhau, chẳng hạn như sửa chữa, nhuộm màu và khử màu.
Sự khác biệt giữa Coomassie và Bạc ố là gì?
NhuộmCoomassie là kỹ thuật nhuộm protein sử dụng màu xanh lam rực rỡ coomassie, trong khi nhuộm mảnh là kỹ thuật nhuộm protein sử dụng màu bạc. Vì vậy, đây là điểm khác biệt chính giữa Coomassie và nhuộm bạc. Hơn nữa, nhuộm Coomassie ít nhạy hơn nhuộm bạc.
Đồ họa thông tin dưới đây liệt kê sự khác biệt giữa Coomassie và nhuộm bạc ở dạng bảng để so sánh song song.
Tóm tắt - Coomassie vs Bạc nhuộm
Để hình dung protein, có thể thực hiện phản ứng hóa học liên kết với thuốc nhuộm hoặc tạo màu cụ thể với protein. Đây được gọi là nhuộm protein. Coomassie và nhuộm bạc là hai kỹ thuật được sử dụng trong nhuộm protein. Kỹ thuật nhuộm Coomassie sử dụng màu xanh lam rực rỡ coomassie trong khi nhuộm cúi sử dụng vết bạc. Vì vậy, đây là điểm khác biệt chính giữa Coomassie và nhuộm bạc.
