Sự khác biệt chính - Nitrocellulose vs PVDF
Western blotting là một phương pháp cho phép phát hiện và định lượng các protein cụ thể từ một mẫu protein. Độ tin cậy của kỹ thuật phụ thuộc vào việc lựa chọn một màng chính xác để hấp thụ protein từ gel. Có nhiều loại màng vi xốp khác nhau. Màng nitrocellulose và PVDF là hai loại màng được các nhà nghiên cứu ưa thích do các thuộc tính đặc biệt của chúng so với các loại màng khác. Việc lựa chọn giữa nitrocellulose hoặc PVDF cũng là một thách thức khác trong quá trình thấm phương tây. Cả nitrocellulose và PVDF đều có khả năng hấp thụ protein cao. Sự khác biệt chính giữa màng nitrocellulose và PVDF là màng nitrocellulose không có khả năng loại bỏ kháng thể và tái sử dụng màng để chống lại kháng thể trong khi màng PVDF có khả năng loại bỏ và tái sử dụng.
Nitrocellulose là gì?
Nitrocellulose là một polyme được sản xuất bằng cách xử lý cellulose với axit nitric và được sử dụng để tạo màng vi xốp trong sinh học phân tử, đặc biệt cho các kỹ thuật thấm như thấm phương nam, phương bắc và phương tây. Kích thước lỗ của màng nitrocellulose từ 3 đến 20 µm. Các màng vi xốp nitrocellulose tạo điều kiện phát hiện phản ứng hóa miễn dịch xảy ra trên bề mặt của màng. Do đó, màng nitrocellulose thường được sử dụng để cố định protein và phát hiện các protein cụ thể trong phương pháp thấm tây. Màng nitrocellulose cũng có thể cố định glycoprotein và axit nucleic.
Màng nitrocellulose được ưu tiên trong các xét nghiệm dòng chảy bên do một số tính năng. Màng nitrocellulose hấp thụ protein ở nồng độ cao. Dung môi được sử dụng để làm ướt màng không làm giảm khả năng hấp thụ protein của màng nitrocellulose. Màng nitrocellulose có thể dễ dàng cắt theo kích thước gel mong muốn và chuyển protein từ gel sang màng bằng phương pháp truyền điện hoặc mao dẫn. Nitrocellulose cho phép dòng protein nhanh hơn qua màng với điện thế liên kết cao. Nitrocellulose cho thấy sức mạnh xử lý được cải thiện. Một thuộc tính đặc biệt khác của màng nitrocellulose là nó có thể dễ dàng dán bằng chất kết dính chịu nước không dung môi lên các lớp nền nhựa khác nhau.
Hình 01: Màng nitrocellulose để thấm phương tây
PVDF là gì?
Polyvinylidene difluoride (PVDF) là chất fluoropolymer được tạo ra từ quá trình trùng hợp vinylidene difluoride và có khả năng cố định protein cao. Do đó, màng vi xốp làm từ PVDF được sử dụng trong kỹ thuật thấm phương tây để phân tích các protein cụ thể từ hỗn hợp protein. Màng PVDF cũng có thể được sử dụng để phân tích axit amin và xác định trình tự protein. Đặc điểm quan trọng nhất của màng PVDF so với màng nitrocellulose là nó có thể dễ dàng loại bỏ các kháng thể và sử dụng lại cho các đầu dò kháng thể tiếp theo.
Màng PVDF dày hơn màng nitrocellulose; do đó, khả năng chống lại các thiệt hại trong quá trình sử dụng cao hơn. Màng PVDF rất kỵ nước. Vì vậy, chúng phải được ngâm trong methanol hoặc isopropanol trước khi sử dụng.
Sự khác biệt giữa Nitrocellulose và PVDF là gì?
Nitrocellulose vs PVDF |
|
| Nitrocellulose là một polyme bao gồm cellulose. | PVDF là một chất fluoropolyme được tạo ra bằng quá trình trùng hợp vinylidene difluoride. |
| Kích thước lỗ màng | |
| Kích thước lỗ chân lông điển hình là 0,1, 0,2 hoặc 0,45μ | Kích thước lỗ chân lông điển hình là 0,1, 0,2 hoặc 0,45μm |
| Khả năng liên kết protein | |
| Nitrocellulose có khả năng liên kết protein từ 80 đến 100 μg / cm2. | PVDF có khả năng liên kết protein từ 170 đến 200 μg / cm2. |
| Độ nhạy | |
| Cái này có độ nhạy thấp so với PVDF. | Điều này có độ nhạy cao. |
| Phát hiện Protein Biểu hiện Kém | |
| Vì màng nitrocellulose có độ nhạy thấp, nên nó không thích hợp để phát hiện các protein biểu hiện thấp. | Điều này phù hợp hơn để phát hiện các protein biểu hiện thấp do độ nhạy cao của nó. |
| Tiếng ồn nền | |
| Cái này có tiếng ồn xung quanh thấp hơn | Cái này có tiếng ồn xung quanh cao hơn. |
| Tương tác với Protein | |
| Các phân tử protein liên kết với màng nitrocellulose thông qua tương tác kỵ nước. | Protein liên kết với màng PVDF thông qua tương tác kỵ nước và lưỡng cực. |
| Bản chất của Màng | |
| Nitrocellulose giòn và dễ vỡ. Tuy nhiên, các phiên bản của nitrocellulose đều có sẵn và chúng có khả năng chống lại. | PVDF bền hơn và có khả năng chống hóa chất cao hơn. |
| Khả năng tước và tái sử dụng | |
| Nitrocellulose có thể gặp khó khăn trong việc loại bỏ và lặp lại mà không làm mất tín hiệu. | PVDF lý tưởng cho các ứng dụng lặp lại và giải trình tự. |
| Phù hợp | |
| Nitrocellulose lý tưởng để phát hiện các protein có trọng lượng phân tử thấp. | PVDF thích hợp hơn để phát hiện các protein có trọng lượng phân tử cao hơn. |
| Công dụng khác | |
| Nitrocellulose có thể được sử dụng để phân tích axit nucleic và thấm chấm / khe. | PVDF có thể được sử dụng cho các hệ thống phân tích trình tự protein và xét nghiệm pha rắn. |
| Chi phí | |
| Loại này rẻ hơn màng PVDF. | Loại này đắt hơn màng nitrocellulose. |
| Cần làm ướt trước | |
| Màng nitrocellulose không cần ngâm trước với methanol | Màng PVDF yêu cầu ngâm trước với metanol. |
Tóm tắt - Nitrocellulose vs PVDF
Màng nitrocellulose là màng đầu tiên được sử dụng thương mại để xét nghiệm dòng chảy bên. Chúng có khả năng hấp thụ protein cao. Vì vậy, màng nitrocellulose được sử dụng trong phương tây thấm. PVDF là một loại màng khác được sử dụng trong quá trình thấm phương tây và nó cũng có khả năng hấp thụ protein cao. Cả hai loại đều được sử dụng trong phương pháp thấm phương tây để phân tích protein. Tuy nhiên, màng PVDF có nhiều thuộc tính đặc biệt hơn nên phù hợp hơn màng nitrocellulose để thấm phương tây. Nhưng, màng nitrocellulose thích hợp hơn để phát hiện các protein có trọng lượng phân tử thấp, màng PVDF thích hợp hơn để phát hiện các protein có trọng lượng phân tử cao. Đây là sự khác biệt giữa màng nitrocellulose và PVDF.
