Sự khác biệt chính giữa miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp là miễn dịch huỳnh quang trực tiếp sử dụng một kháng thể duy nhất hoạt động chống lại mục tiêu quan tâm trong khi miễn dịch huỳnh quang gián tiếp sử dụng hai kháng thể để đánh dấu mục tiêu quan tâm.
Miễn dịch huỳnh quang hay hình ảnh tế bào là một kỹ thuật được sử dụng để gắn nhãn một kháng nguyên đích cụ thể với một fluorophore. Ở đây, fluorophore là một hợp chất hóa học huỳnh quang có thể tái phát ra ánh sáng khi bị kích thích bởi ánh sáng. Khi một fluorophore liên kết với kháng nguyên đích, nó cho phép phát hiện phân tử đích trong mẫu. Để mô tả thêm, khi một kháng nguyên liên kết với một kháng thể cụ thể, nó có thể được liên hợp với các fluorophores. Do đó, có thể dễ dàng phát hiện sự hiện diện của kháng nguyên đích trong mẫu khi quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang.
Bên cạnh đó, có hai loại miễn dịch huỳnh quang; miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp. Sự khác biệt giữa miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp chủ yếu nằm ở số lượng kháng thể được sử dụng và sự liên hợp fluorophore. Có nghĩa là, trong miễn dịch huỳnh quang trực tiếp, fluorophore liên hợp trực tiếp với kháng thể chính trong khi miễn dịch huỳnh quang gián tiếp, fluorophore kết hợp với kháng thể thứ cấp.
Miễn dịch huỳnh quang trực tiếp là gì?
Miễn dịch huỳnh quang sử dụng kháng thể để phát hiện kháng nguyên đích cụ thể. Miễn dịch huỳnh quang trực tiếp là một trong hai loại miễn dịch huỳnh quang. Trong miễn dịch huỳnh quang trực tiếp, một kháng thể đơn (kháng thể chính) liên quan và fluorophore kết hợp trực tiếp với kháng thể chính. Khi liên kết kháng thể với kháng nguyên đích, fluorophore phát ra huỳnh quang có thể được phát hiện bằng kính hiển vi huỳnh quang.
Hình 01: Miễn dịch huỳnh quang trực tiếp
Tuy nhiên, phương pháp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp là một phương pháp đắt tiền vì các kháng thể liên hợp chính đắt hơn so với các kháng thể thứ cấp. Tuy nhiên, nó không liên quan đến một bước bổ sung, do đó, một kỹ thuật ngắn hơn. Hơn nữa, các liên kết không đặc hiệu bị giảm trong quá trình miễn dịch huỳnh quang trực tiếp. Do đó, phản ứng chéo giữa các loài thấp. Nhưng khi phát hiện, độ nhạy của huỳnh quang miễn dịch trực tiếp yếu hơn so với huỳnh quang miễn dịch gián tiếp.
Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp là gì?
Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp là loại miễn dịch huỳnh quang thứ hai liên quan đến hai loại kháng thể như kháng thể chính và kháng thể thứ cấp trong việc ghi nhãn kháng nguyên đích. Trong phương pháp này, fluorophore kết hợp với kháng thể thứ cấp. Do đó, kỹ thuật này bao gồm một bước bổ sung.
Hình 02: Miễn dịch huỳnh quang
Tuy nhiên, phương pháp này có độ nhạy cao vì một số fluorophores có thể được liên hợp với các kháng thể thứ cấp và nó giúp việc phát hiện dễ dàng hơn. Hơn nữa, miễn dịch huỳnh quang gián tiếp ít tốn kém hơn do sự liên hợp của các kháng thể thứ cấp ít tốn kém và dễ dàng hơn. So với phương pháp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp, phản ứng chéo giữa các loài cao hơn trong phương pháp gián tiếp.
Điểm giống nhau giữa miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp là gì?
- Đây là hai loại kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang.
- Kháng thể chính và fluorophore liên quan đến cả hai phương pháp.
- Ngoài ra, phản ứng kháng nguyên-kháng thể xảy ra trong cả hai phương pháp.
- Hơn nữa, cả miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp đều sử dụng kính hiển vi huỳnh quang để phát hiện kháng nguyên.
Sự khác biệt giữa miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp là gì?
Miễn dịch huỳnh quang có thể trực tiếp hoặc gián tiếp dựa trên sự liên hợp fluorophore với các kháng thể được sử dụng. Trong phương pháp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp, fluorophore kết hợp với kháng thể chính, là kháng thể đơn lẻ liên quan đến kỹ thuật này. Ngược lại với điều đó, trong phương pháp miễn dịch huỳnh quang gián tiếp, fluorophore kết hợp với kháng thể thứ cấp, là một trong hai loại kháng thể liên quan đến kỹ thuật này. Do đó, sự khác biệt chính giữa miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp là loại kháng thể kết hợp với fluorophore.
Infographic sau cung cấp một so sánh song song về sự khác biệt giữa miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp.
Tóm tắt - Miễn dịch huỳnh quang Trực tiếp vs Gián tiếp
Miễn dịch huỳnh quang là một kỹ thuật được sử dụng để phát hiện sự hiện diện của các kháng nguyên cụ thể trong một mẫu. Kỹ thuật này sử dụng các kháng thể đặc hiệu. Do đó, trong trường hợp này, các kháng thể kết hợp với các fluorophores để phát hiện chúng bằng kính hiển vi huỳnh quang. Hơn nữa, có hai loại miễn dịch huỳnh quang là miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp. Miễn dịch huỳnh quang trực tiếp liên quan đến một kháng thể duy nhất và fluorophore liên hợp trực tiếp với kháng thể này. Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp liên quan đến hai kháng thể; sơ cấp và thứ cấp và fluorophore kết hợp với kháng thể thứ cấp. Vì một số kháng thể thứ cấp có thể liên kết với một kháng thể chính và một số fluorophores có thể kết hợp với các kháng thể thứ cấp, phương pháp miễn dịch huỳnh quang gián tiếp là một phương pháp nhạy hơn phương pháp trực tiếp. Hơn nữa, phương pháp gián tiếp ít tốn kém hơn so với phương pháp trực tiếp. Vì vậy, đây là sự khác biệt giữa miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và gián tiếp.
