Sự khác biệt chính - Thử nghiệm giữa ấm và lạnh
Trypsinization ấm và lạnh là hai phương pháp được sử dụng để phân tách tế bào bằng enzym trong nuôi cấy tế bào động vật. Sự khác biệt chính giữa trypsin hóa ấm và lạnh, như tên gọi cho thấy, phụ thuộc vào nhiệt độ mà trypsin được thêm vào để phân tách tế bào. Quá trình trypin hóa ấm diễn ra trong điều kiện nhiệt độ cao hơn (36,5 - 370C) trong khi quá trình trypin hóa lạnh diễn ra trong điều kiện nhiệt độ thấp.
Trong quá trình nuôi cấy tế bào sơ cấp của tế bào động vật, có ba phương pháp chính được sử dụng và đã được chứng minh là thành công. Ba phương pháp bao gồm phân tách tế bào cơ học, phân tách tế bào bằng enzym và kỹ thuật mẫu cấy sơ cấp. Sự phân tách tế bào bằng enzym dẫn đến sự cô lập của các tế bào và nó được thực hiện bởi enzym phân giải protein trypsin. Do đó, quá trình này được gọi là Trypsinization. Trypsinization có thể được thực hiện trong hai điều kiện khác nhau là Trypsinization ấm và Trypsinization lạnh. Trypsinization ấm là phương pháp xử lý tế bào bằng trypsin trong điều kiện ấm ở nhiệt độ 36,5 - 370C. Thử nghiệm lạnh là quá trình xử lý trypsin diễn ra trong điều kiện lạnh hơn, tốt hơn là trong nước đá duy trì nhiệt độ rất thấp.
Warm Trypsinization là gì?
Trypsinization có thể được thực hiện để phân tách các thành phần tế bào nhằm phân lập các tế bào để tạo ra một tế bào nuôi cấy chính. Trypsin là một enzym phân giải protein, và hỗn hợp enzym được sử dụng trong quá trình trypsin hóa có thể là một chiết xuất thô hoặc một sản phẩm tinh khiết. Chiết xuất thô được cho là hiệu quả hơn trong việc phân giải protein và phân hủy tế bào vì nó chứa các enzym phân hủy khác.
Trypsinization ấm là phương pháp enzym được sử dụng phổ biến nhất để phân tách tế bào diễn ra trong điều kiện nhiệt độ cao hơn. Trước khi xử lý bằng phương pháp trypsinization, mô mong muốn được cắt thành nhiều mảnh nhỏ hơn. Nó tạo điều kiện cho quá trình phân tổ dễ dàng. Sau đó, các mô cắt nhỏ được rửa trong một môi trường đặc biệt được gọi là môi trường Muối cơ bản bóc tách.
Sau khi hoàn thành bước rửa, các tế bào được chuyển thành một bình chứa enzym hoạt động, đó là trypsin. Vì kỹ thuật này ngụ ý một giao thức trypsinization ấm, trypsin được đặt ở nhiệt độ khoảng 370C trong khoảng bốn giờ.
Hình 01: Trypsin
Các thành phần được trộn và khuấy trộn bằng cách sử dụng phương pháp ly tâm để dễ dàng cho quy trình và để tăng tốc quá trình phân tách. Sau khi đạt được thời gian khuyến nghị, các tế bào có thể được lấy từ phần nổi phía trên. Các tế bào có nguồn gốc từ chất nổi sau đó được ủ ở nhiệt độ và thời gian cụ thể.
Cold Trypsinization là gì?
Quá trình tạo trypin hóa lạnh là một dạng khác của quá trình trypin hóa diễn ra trong điều kiện lạnh. Trong kỹ thuật này, các tế bào được cắt nhỏ và rửa sạch được đặt trong lọ trên đá và sau đó ngâm với trypsin. Thời gian ngâm lâu hơn - khoảng 6 - 24 giờ.
Sau khi hoàn thành quy trình ngâm, trypsin được loại bỏ khỏi dịch lọc tế bào, và các mảnh mô được tiếp tục ủ ở 370C trong khoảng 20 - 30 phút. Sự phân chia của các tế bào được thực hiện bằng cách dùng pipet lặp lại hỗn hợp mô. Điều này sẽ cho phép các tế bào phân ly khỏi màng và đến phần nổi phía trên. Khi các tế bào ở trong phần nổi, chúng được ủ và phát triển ở nhiệt độ và khoảng thời gian mong muốn.
Phương pháp thử lạnh có một số ưu điểm
- Năng suất tế bào sống cao hơn do tổn thương tế bào được giảm thiểu. Tổn thương tế bào được giảm thiểu bằng cách không sử dụng các bước ly tâm.
- Phương pháp cực kỳ tiện lợi.
- Ít tốn công.
Hạn chế chính của phương pháp thử nguội là không thể sử dụng số lượng lớn trong một trường hợp.
Điểm giống nhau giữa quá trình thử nhiệt hóa ấm và lạnh là gì?
- Cả quá trình Trypsinization Ấm và Lạnh đều sử dụng men trypsin để phân tách các tế bào.
- Cả hai quy trình Trypsinization Ấm và Lạnh đều được sử dụng trong quy trình nuôi cấy tế bào để phân tách các tế bào.
- Trong cả quy trình điều trị Trypsinization Ấm và Lạnh, các tế bào có nguồn gốc từ lớp nổi trên.
Sự khác biệt giữa Trypsinization Ấm và Lạnh là gì?
Ấm so với Thử nghiệm lạnh |
|
| Ủ trypsin hóa ấm là phương pháp xử lý tế bào bằng trypsin trong điều kiện ấm áp ở nhiệt độ 36,5 - 370. | Thử nghiệm lạnh là quá trình xử lý trypsin diễn ra trong điều kiện lạnh hơn, tốt hơn là trong nước đá duy trì nhiệt độ rất thấp. |
| Giao thức | |
| Các mảnh mô được cắt nhỏ được duy trì ở 370C liên tục trong suốt quy trình. | Các mẩu mô cắt nhỏ ban đầu được duy trì ở nhiệt độ lạnh như đá và sau đó được duy trì ở 370. |
| Nhiệt độ | |
| Quá trình trypsinization ấm xảy ra ở 36,5 - 370 | Quá trình trypsinization lạnh xảy ra ở nhiệt độ lạnh như băng. |
| Thời gian đã tiêu tốn | |
| Cần ít thời gian hơn cho toàn bộ quy trình (khoảng 4 giờ) của quá trình trypsinization ấm. | Cần thời gian lâu hơn (khoảng 6 - 24 giờ) để thử lạnh. |
| Sản lượng Tế bào khả thi | |
| Ít trypsinization ấm. | Cao trypsinization lạnh. |
| Sử dụng máy ly tâm | |
| Ly tâm là cần thiết để phân tách các tế bào trong quá trình trypsinization ấm. | Ly tâm không cần thiết trong quá trình thử nghiệm lạnh. |
| Số lượng mô ban đầu để thử nghiệm | |
| Một lượng lớn khăn giấy có thể được sử dụng trong quá trình trypsinization ấm. | Một lượng nhỏ hơn có thể được sử dụng trong quá trình thử nghiệm lạnh. |
| Thiệt hại tế bào | |
| Cao do ly tâm trong quá trình trypsinization ấm. | Ít hơn do quá trình thử nghiệm lạnh. |
Tóm tắt - Thử nghiệm nóng và lạnh
Trypsinization là phương pháp sử dụng men trypsin phân hủy protein để phân tách và chuẩn bị các mẫu tế bào sơ cấp trong quá trình nuôi cấy tế bào. Có hai kỹ thuật chính của trypsinization dựa trên nhiệt độ được sử dụng trong quy trình. Chúng là trypsinization ấm và lạnh. Quá trình trypin hóa ấm được thực hiện ở 370C trong khi quá trình trypin hóa lạnh được thực hiện trong điều kiện lạnh có đá. Mặc dù quá trình thử nghiệm hóa lạnh mất nhiều thời gian hơn để hoàn thành, nhưng nó được cho là có năng suất tế bào sống cao hơn. Điều này là do thực tế là tổn thương tế bào được giảm thiểu trong quá trình trypsin hóa lạnh vì nó không sử dụng các bước ly tâm mạnh. Đây là sự khác biệt giữa trypsinization ấm và lạnh.
