Sự khác biệt chính - RNASE A vs RNASE H
Các ribonuclease là các nuclease đặc biệt phân hủy RNA thành các đơn vị nhỏ hơn. Chúng có thể được chia thành hai loại; endoribonucleases và exoribonucleases. Endoribonuclease là một endonuclease có thể phân hủy RNA sợi đơn hoặc sợi kép. Nó phân cắt các liên kết phosphodiester trong chuỗi polynucleotide RNA. Các ví dụ là RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P và RNase H. Exoribonuclease là một exonuclease phân hủy RNA bằng cách loại bỏ nucleotide đầu cuối từ 5 đầu hoặc 3 đầu của phân tử RNA. Các ví dụ là RNase R, RNase II, RNase D và RNase PH. Sự khác biệt chính giữa RNASE A và RNASE H là RNase A là một ribonuclease của tuyến tụy có chức năng phân hủy đặc biệt RNA sợi đơn thành các thành phần nhỏ hơn trong khi RNase H là một enzyme không đặc hiệu phân cắt RNA trong phép lai RNA-DNA thành các đơn vị nhỏ hơn thông qua cơ chế thủy phân.
RNASE A là gì?
RNase A là một ribonuclease của tuyến tụy, đặc biệt phân cắt các gốc cytosine và uracil chưa ghép đôi ở đầu 3’của RNA sợi đơn. RNase H hoạt động ở nồng độ muối cao hơn (nồng độ NaCl từ 0,3M trở lên). Phản ứng thủy phân gồm hai bước. Nó tạo thành sản phẩm 3’được photphoryl hóa thông qua chất trung gian monophotphat mạch vòng 2’, 3’. Mặc dù nó là đặc trưng cho RNA sợi đơn ở nồng độ muối cao hơn, nó cũng có thể phân hủy RNA sợi đôi và RNA trong lai RNA-DNA ở nồng độ NaCl thấp hơn (thấp hơn 0,3M NaCl).
Bruce Merrifield lần đầu tiên tổng hợp được loại enzyme này. RNase A là một loại enzyme rất phổ biến trong nghiên cứu phân tử. RNase A của tuyến tụy bò là một ví dụ của RNase A. Và nó là một trong những enzyme cứng nhất được sử dụng trong phòng thí nghiệm. Enzyme này không cần một đồng yếu tố cho hoạt động của nó. Nó là một loại enzyme có khả năng điều nhiệt cao. RNase A là enzym đầu tiên và là protein thứ ba mà trình tự axit amin chính xác được phát hiện. Enzyme này rất nhỏ với 124 axit amin và khối lượng phân tử là 12600da. Và nó có bốn gốc Histidine (His 12 và His 119 liên quan đến phản ứng xúc tác).
Hình 01: RNase A
RNase A có thể được phân lập bằng cách đun sôi một mẫu thô. Khi đun sôi, tất cả các enzym khác sẽ phân giải RNase A. RNase A còn lại là một enzym ổn định đáng kinh ngạc. Enzyme này ức chế với protein ức chế ribonuclease, phức hợp vanadate kim loại nặng và uridine.
RNase H là gì?
RNase H là một enzyme ribonuclease không đặc hiệu có thể phân hủy RNA trong quá trình lai RNA-DNA thông qua phản ứng thủy phân. RNase H cắt liên kết 3’- O-P của RNA trong một phép lai RNA-DNA. Cuối cùng, nó tạo ra các sản phẩm kết thúc 3’OH và 5’photphat. Trong quá trình sao chép DNA, nó đóng một vai trò quan trọng bằng cách loại bỏ đoạn mồi RNA sau khi các sợi DNA mới được hình thành. Trong điều kiện phòng thí nghiệm, nó phân hủy đặc biệt RNA ở dạng lai RNA-DNA nhưng không phân hủy DNA và RNA không kết hợp. Và enzyme này thường được sử dụng để phá hủy khuôn mẫu RNA sau khi sợi DNA bổ sung đầu tiên được hình thành trong quá trình tổng hợp cDNA.
Hình 02: RNase H
RNase H cũng được sử dụng trong các thử nghiệm bảo vệ nuclease. Nó cũng có thể được kết hợp để loại bỏ đuôi poly A khỏi mRNA. RNase H có khả năng phá hủy RNA không mã hóa bên trong và bên ngoài tế bào. Các ion kim loại được yêu cầu làm đồng yếu tố cho hoạt động của protein này. Chelator (EDTA) có thể được sử dụng để ức chế enzym RNase H.
Điểm giống nhau giữa RNASE A và RNASE H là gì?
- Cả hai đều có bản chất là protein.
- Cả hai đều là endoribonuclease
- Cả hai đều có thể phân hủy RNA.
- Cả hai đều thực hiện phản ứng thủy phân.
- Phòng thí nghiệm phân tử sử dụng cả hai thứ này.
Sự khác biệt giữa RNASE A và RNASE H là gì?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNase A là một ribonuclease của tuyến tụy, đặc biệt phân cắt đầu 3’của gốc cytosine và uracil chưa ghép đôi của RNA sợi đơn ở nồng độ muối cao hơn. | RNase H là một enzyme ribonuclease không đặc hiệu có thể phân hủy RNA trong quá trình lai RNA-DNA thông qua phản ứng thủy phân. |
| Bản chất của RNA Cleaving | |
| RNase A phân cắt đặc biệt RNA sợi đơn ở nồng độ muối cao hơn. | RNase H phân cắt RNA trong phép lai RNA-DNA. |
| Cần các yếu tố đồng hành cho Hoạt động | |
| RNase A không cần đồng yếu tố cho hoạt động của nó. | RNase H cần các ion kim loại làm đồng yếu tố cho hoạt động của nó. |
| Chất ức chế hoạt động của protein | |
| Protein ức chế Ribonuclease, phức hợp vanadate kim loại nặng và uridine ức chế hoạt động của RNAse A. | Chất chelator (EDTA) ức chế hoạt động của RNase H. |
| Loại bỏ mồi RNA trong sao chép DNA | |
| RNase A không được sử dụng để loại bỏ mồi RNA trong quá trình sao chép DNA. | RNase H được sử dụng để loại bỏ mồi RNA trong quá trình sao chép DNA |
| Loại bỏ mẫu DNA trong Tổng hợp DNA bổ sung (C-DNA) | |
| RNase A không được sử dụng để loại bỏ khuôn mẫu RNA trong quá trình tổng hợp DNA bổ sung (C-DNA). | RNase H được sử dụng để loại bỏ khuôn mẫu RNA trong quá trình tổng hợp DNA bổ sung (C-DNA). |
| Loại bỏ Poly-A-Tail trong mRNA Lai tạo thành Oligo (dt) | |
| RNase A không được sử dụng để loại bỏ “đuôi poly-A” trong mRNA được lai với oligo (dt). | RNase H được sử dụng để loại bỏ “đuôi poly-A” trong mRNA được lai với oligo (dt) |
Tóm tắt - RNASE A vs RNASE H
Các ribonuclease là các enzym nuclease có khả năng phân cắt RNA thành các đơn vị nhỏ hơn. Chúng là hai loại; endoribonucleases và exoribonucleases. Endoribonuclease là một endonuclease có khả năng phân hủy RNA sợi đơn hoặc sợi kép. Và nó phân cắt liên kết phosphodiester trong chuỗi polynucleotide RNA. RNase A và RNase H là hai endoribonuclease. RNase A là một ribonuclease của tuyến tụy phân cắt đặc biệt các gốc cytosine và uracil chưa ghép đôi ở đầu 3’của RNA sợi đơn ở nồng độ muối cao hơn. RNase H là một enzyme ribonuclease không đặc hiệu có thể phân hủy RNA trong quá trình lai RNA-DNA thông qua phản ứng thủy phân. Đây là sự khác biệt giữa RNase A và RNase H.
Tải xuống bản PDF RNASE A vs RNASE H
Bạn có thể tải xuống phiên bản PDF của bài viết này và sử dụng nó cho mục đích ngoại tuyến theo ghi chú trích dẫn. Vui lòng tải xuống phiên bản PDF tại đây Sự khác biệt giữa RNASE A và RNASE H
