Sự khác biệt chính - Forward vs Reverse Primer
Polymerase chain reaction (PCR) là một phương pháp khuếch đại DNA được sử dụng trong các ứng dụng Sinh học Phân tử. Đây là một kỹ thuật thường được sử dụng để tạo ra hàng triệu đến hàng tỷ bản sao của một chuỗi DNA đặc biệt quan tâm. Nó là một phương pháp in vitro được thực hiện trong các phòng thí nghiệm. Kỹ thuật PCR hoàn toàn phụ thuộc vào DNA polymerase được sản xuất thương mại gọi là Taq polymerase. Và nó cũng yêu cầu một số thành phần khác và duy trì nhiệt độ thích hợp. Một thành phần quan trọng là sơn lót. Mồi là các trình tự DNA ngắn được thiết kế đặc biệt cho trình tự DNA đích. Chúng thường có chiều dài khoảng 20 nucleotide. Taq polymerase xúc tác việc thêm các nucleotide vào trình tự nucleotide đã có từ trước. Do đó, mồi được coi là điểm khởi đầu của quá trình tổng hợp các sợi mới. Taq polymerase chỉ hoạt động theo chiều 5’đến 3’ do đó quá trình tổng hợp DNA xảy ra theo cùng chiều từ 5’đến 3’. Vì DNA là chuỗi kép, nên cần có hai loại mồi trong PCR. Chúng được gọi là sơn lót thuận và sơn lót ngược. Mồi thuận và mồi ngược được gọi là dựa trên hướng kéo dài của đoạn mồi trong DNA khi quá trình tổng hợp DNA xảy ra. Chuyển tiếp mồi liên kết với sợi DNA antisense và bắt đầu tổng hợp sợi + ve của gen theo hướng 5 'đến 3'. Đảo ngược mồi mồi với sợi giác và bắt đầu tổng hợp sợi bổ sung của sợi mã hóa; đó là –mạch của gen thành chiều 5’đến 3’. Đây là điểm khác biệt chính giữa mồi thuận và mồi ngược.
Forward Primer là gì?
Định hướng thuận là sự tổng hợp của chuỗi mã hóa hoặc chuỗi cảm giác của gen. Taq polymerase xúc tác quá trình tổng hợp một sợi mới theo hướng 5’đến 3’. Quá trình tổng hợp sợi mã hóa xảy ra khi đoạn mồi liên kết với sợi không mã hóa hoặc sợi đối âm và kéo dài theo hướng 5 'đến 3'.
Hình 01: Mồi xuôi và ngược
Mồi kết hợp với sợi antisense hoặc sợi không mã hóa hoặc sợi khuôn được gọi là mồi thuận vì mồi thuận đóng vai trò là điểm khởi đầu cho quá trình tổng hợp mã hóa hoặc chuỗi dương của gen. Đoạn mồi chuyển tiếp có trình tự nucleotide ngắn bổ sung cho đầu 3 'của sợi antisense. Nó lai với sợi antisense và tạo điều kiện cho Taq polymerase thêm nucleotide bổ sung vào sợi khuôn.
Reverse Primer là gì?
Mồi ngược là chuỗi DNA ngắn kết hợp với đầu 3’của sợi giác hoặc sợi mã hóa. Đoạn mồi ngược đóng vai trò là điểm bắt đầu để tổng hợp chuỗi bổ sung của trình tự mã hóa hoặc trình tự không mã hóa. Mồi ngược được thiết kế bổ sung cho đầu 3’của sợi mã hóa. Do đó, nó liên kết với đầu 3 'của sợi mã hóa và cho phép Taq polymerase tổng hợp sợi antisense hoặc sợi khuôn mẫu. Vì hướng của nó theo cách đảo ngược, lớp sơn lót này được gắn nhãn là lớp sơn lót ngược.
Cả mồi ngược và mồi thuận đều quan trọng để tạo ra hàng triệu đến hàng tỷ bản sao của các vùng DNA cụ thể được nhắm mục tiêu hoặc quan tâm.
Điểm tương đồng giữa Primer xuôi và ngược là gì?
- Cả mồi xuôi và mồi ngược đều được làm từ oligonucleotide.
- Cả mồi xuôi và mồi ngược đều sở hữu trình tự nucleotide ngắn bổ sung cho các đầu bên của chuỗi kép DNA.
- Cả mồi xuôi và mồi ngược thường bao gồm 20 nucleotide.
- Cả mồi xuôi và ngược đều được sử dụng trong chuỗi phản ứng polymerase.
- Cả Sơn lót xuôi và ngược đều được tổng hợp thương mại.
- Cả mồi xuôi và mồi ngược đều ổn định về nhiệt độ và chúng thường có Tm giống nhau.
- Cả Mồi thuận và Mồi ngược đều được ủ với trình tự DNA đích.
- Cả Mồi xuôi và ngược đều được thiết kế theo phản ứng PCR.
- Cả Mồi thuận và Mồi ngược đều được dùng làm điểm khởi đầu cho quá trình khuếch đại DNA.
- Cả mồi ngược và mồi thuận đều quan trọng đối với việc sản xuất hàng triệu bản sao của các vùng cụ thể của trình tự DNA được nhắm mục tiêu hoặc quan tâm.
Sự khác biệt giữa Sơn lót xuôi và ngược là gì?
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Đoạn mồi chuyển tiếp là trình tự DNA ngắn lai với đầu 3’của không mã hóa hoặc chuỗi khuôn mẫu của gen và đóng vai trò là điểm bắt đầu để tổng hợp trình tự mã hóa. | Đoạn mồi ngược là chuỗi DNA ngắn lai với đầu 3’của mã hóa hoặc sợi không mã hóa và đóng vai trò là điểm bắt đầu để tổng hợp trình tự không mã hóa. |
| Dây quấn | |
| Chuyển tiếp quá trình ủ sơn lót với sợi mẫu. | Ủ ngược lớp sơn lót với sợi nontemplate. |
| Kết quả Trình tự Mới | |
| Đoạn mồi chuyển tiếp tạo điều kiện tổng hợp trình tự mã hóa. | Mồi ngược tạo điều kiện tổng hợp chuỗi không mã hóa. |
Tóm tắt - Forward vs Reverse Primer
Có hai loại mồi liên quan đến kỹ thuật PCR. Chúng là cặp mồi thuận và nghịch. Dựa trên sự kéo dài của đoạn mồi trong quá trình tổng hợp sợi DNA mới, các đoạn mồi này được đánh dấu hoặc đặt tên. Taq polymerase tổng hợp DNA mới theo hướng 5 'đến 3'. Do đó, mồi được thiết kế bổ sung cho 3 đầu của sợi đôi. Đoạn mồi chuyển tiếp kéo dài theo hướng 5 'đến 3' sẽ lai với đầu 3 'của phản âm hoặc khuôn mẫu hoặc trình tự không mã hóa. Nó đóng vai trò là điểm khởi đầu để tổng hợp chuỗi mã hóa. Mồi ngược kéo dài theo hướng 5’đến 3’ sẽ lai với đầu 3’của mã hóa hoặc không có màng hoặc sợi giác. Nó đóng vai trò là điểm bắt đầu để tổng hợp chuỗi không mã hóa. Đây là sự khác biệt giữa sơn lót thuận và sơn lót ngược.
