Sự khác biệt chính giữa FPLC và HPLC là FPLC là một loại sắc ký lỏng giúp tinh chế các phân tử sinh học lớn như protein, nucleotit và peptit, trong khi HPLC là một loại sắc ký lỏng phân tách các hợp chất có trọng lượng phân tử nhỏ.
Sắc ký lỏng là một kỹ thuật được sử dụng để tách một mẫu thành các thành phần riêng lẻ của nó. Sự phân tách này xảy ra do sự tương tác của các mẫu cụ thể với pha động và pha tĩnh. Các thành phần trong mẫu được phân tách dựa trên ái lực của từng thành phần đối với pha động trong sắc ký lỏng. Khi pha động và mẫu đi qua một cột, các thành phần của mẫu bắt đầu tách thành các dải có thể được phát hiện bằng quang phổ UV-VIS. Do đó, FPLC và HPLC là hai loại kỹ thuật sắc ký lỏng.
FPLC là gì?
FPLC là một loại sắc ký lỏng tinh chế các phân tử sinh học lớn như protein, nucleotide và peptide. Phương pháp sắc ký lỏng protein nhanh (FPLC) lần đầu tiên được phát triển và tiếp thị tại Thụy Điển bởi công ty Pharmacia vào năm 1982. Nó thường được sử dụng để phân tích hoặc tinh chế hỗn hợp protein. Điều này diễn ra dựa trên nguyên tắc của các thành phần mẫu phụ thuộc vào chất lỏng chuyển động (pha động) và vật liệu rắn xốp (pha tĩnh). Trong FPLC, pha động là một chất đệm, và pha tĩnh là một loại nhựa bao gồm các hạt. Nó thường bao gồm agarose liên kết chéo được đóng gói trong một cột thủy tinh hoặc nhựa hình trụ.
Hình 01: Thiết bị FLPC (Sắc ký lỏng protein nhanh)
Trong hầu hết các chiến lược FLPC, nhựa trao đổi ion được sử dụng. Do đó, protein quan tâm sẽ liên kết với nhựa bằng tương tác điện tích. Kỹ thuật FLPC cũng sử dụng hai bộ đệm: bộ đệm 1 (bộ đệm đang chạy) và bộ đệm 2 (bộ đệm rửa giải). Ban đầu, khi dung dịch đệm và hỗn hợp mẫu chạy qua cột, protein quan tâm trong hỗn hợp sẽ liên kết với nhựa bằng tương tác điện tích. Nhưng protein quan tâm sẽ bị phân ly và quay trở lại dung dịch trong dung dịch đệm rửa giải khi dung dịch đệm rửa giải chạy qua cột vào cuối quá trình. Sau đó, dung dịch (dung dịch chứa protein quan tâm) đi qua hai máy dò, đo nồng độ muối và nồng độ protein. Khi mỗi protein được rửa giải, nó sẽ xuất hiện dưới dạng “đỉnh” trong quá trình phát hiện và có thể được thu thập để sử dụng tiếp.
HPLC là gì?
HPLC là một loại sắc ký lỏng dùng để tách các hợp chất có trọng lượng phân tử nhỏ. Năm 1969, HPLC đầu tiên được sản xuất thương mại bởi Tập đoàn Waters, Hoa Kỳ. Trong sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), hỗn hợp mẫu (chất phân tích) trong dung môi (pha động) được bơm qua cột có vật liệu đóng gói sắc ký (pha tĩnh) ở áp suất cao. Hỗn hợp mẫu được mang theo dòng khí mang di chuyển gồm heli hoặc nitơ.
Hình 02: HPLC (Sắc ký lỏng hiệu năng cao)
Các thành phần trong hỗn hợp mẫu có lượng tương tác ít nhất với pha tĩnh hoặc lượng tương tác với pha động nhiều nhất sẽ thoát ra khỏi cột nhanh hơn. Mặt khác, các thành phần trong hỗn hợp mẫu có lượng tương tác với pha tĩnh nhiều nhất hoặc ít tương tác với pha động nhất sẽ ra khỏi cột chậm hơn. Dựa trên nguyên lý tương tác trên có thể tách được các thành phần của hỗn hợp mẫu. Hơn nữa, máy dò dụng cụ xác định từng thành phần của hỗn hợp mẫu thoát ra khỏi cột. HPLC được sử dụng để kiểm tra các mẫu môi trường và sinh học về sự hiện diện hoặc không có của các hợp chất đã biết, chẳng hạn như thuốc, chất độc hoặc thuốc trừ sâu. Nó được sử dụng trong các ngành công nghiệp khác nhau như dược phẩm, môi trường, pháp y và hóa chất.
Điểm giống nhau giữa FPLC và HPLC là gì?
- FPLC và HPLC là các loại sắc ký lỏng.
- Cả hai đều được sử dụng để tách và xác định các mẫu sinh học.
- Chúng có pha động lỏng và pha tĩnh rắn.
- Cả hai kỹ thuật đều sử dụng một cột để chuyển qua mẫu.
- Những kỹ thuật này sử dụng máy bơm, máy dò, van và phần mềm để tách và phát hiện mẫu.
Sự khác biệt giữa FPLC và HPLC là gì?
FPLC là một loại sắc ký lỏng được sử dụng để tinh chế các phân tử sinh học lớn như protein, nucleotide và peptide. HPLC là một loại sắc ký lỏng được sử dụng để tách các hợp chất có trọng lượng phân tử nhỏ. Vì vậy, đây là điểm khác biệt chính giữa FPLC và HPLC. Hơn nữa, FPLC sử dụng các thiết bị theo dõi độ pH và độ dẫn điện như các giếng làm bộ thu phân đoạn. Ngược lại, HPLC không sử dụng máy theo dõi độ pH và độ dẫn điện cũng như bộ thu thập phân đoạn.
Đồ họa thông tin dưới đây liệt kê thêm sự khác biệt giữa FPLC và HPLC ở dạng bảng.
Tóm tắt - FPLC vs HPLC
Sắc ký là một kỹ thuật phân tích trong phòng thí nghiệm được sử dụng để tách các thành phần ra khỏi hỗn hợp. Người ta chia thành nhiều loại như sắc ký cột, sắc ký khí, sắc ký lỏng, sắc ký trao đổi ion,… FPLC và HPLC là hai loại kỹ thuật sắc ký lỏng. FPLC là một loại sắc ký lỏng được sử dụng để tinh chế các phân tử sinh học lớn như protein, nucleotide và peptit. Mặt khác, HPLC là một loại sắc ký lỏng được sử dụng để tách các hợp chất có trọng lượng phân tử nhỏ. Vì vậy, đây là tóm tắt về sự khác biệt giữa FPLC và HPLC.
