PCR so với PCR thời gian thực
PCR hay phản ứng chuỗi Polymerase là một khám phá mang tính cách mạng trong sinh học phân tử hiện đại, được phát triển lần đầu tiên bởi nhà hóa học Kary Mullis vào năm 1983. Nó cho phép khuếch đại một chuỗi đơn trong một DNA phức tạp để phân tích. Ý tưởng cơ bản của PCR là hai đoạn mồi bổ sung cho các sợi đối diện của trình tự DNA, được định hướng về phía nhau; các đoạn mồi tạo ra các sợi bổ sung, mỗi sợi chứa đoạn mồi khác. Do đó, kết quả là một lượng lớn trình tự tương ứng với DNA nằm giữa hai đoạn mồi. Enzyme DNA polymerase được sử dụng để mở rộng các đoạn mồi trong PCR. DNA polymerase là một loại enzyme ổn định nhiệt và nó có khả năng tồn tại ở nhiệt độ cao (94 đến 95 ° C) được sử dụng để biến tính DNA mẫu.
PCR bao gồm ba bước, đó là lặp đi lặp lại các vòng biến tính, ủ mồi và tổng hợp DNA. Một máy quay vòng nhiệt được sử dụng để thực hiện phản ứng này để nó có thể được lập trình để thay đổi nhiệt độ một cách nhanh chóng và chính xác. Các ứng dụng của PCR là điều tra tội phạm, dấu vân tay DNA, phát hiện mầm bệnh và phân tích DNA của các loài người sơ khai.
PCR Thông thường là gì?
Có ba giai đoạn chính của PCR thông thường, đó là; Giai đoạn khuếch đại DNA, tách PCR và phát hiện các sản phẩm. Việc tách các đoạn DNA thường được thực hiện bằng điện di trên gel agarose. Các sản phẩm sau đó được nhuộm bằng etheiduim bromua. Cuối cùng, sự phát hiện đạt được bằng cách hình dung các dải trên gel dưới ánh sáng UV. Do đó, kết quả cuối cùng của PCR thông thường không được biểu thị bằng số. Thông thường, PCR thông thường chỉ có thể phát hiện một tham số duy nhất.
PCR thời gian thực là gì?
PCR thời gian thực có thể phát hiện sự khuếch đại của các sản phẩm, khi các sản phẩm được tổng hợp. Với sự phát triển của công nghệ, PCR đã trở thành một kỹ thuật rất phổ biến, đặc biệt là để phát hiện và xác định vi khuẩn trong thực phẩm. PCR thời gian thực sử dụng hệ thống nhuộm huỳnh quang và máy đo nhiệt được trang bị khả năng phát hiện huỳnh quang.
Sự khác biệt giữa PCR Thông thường và PCR thời gian thực là gì?
• PCR thông thường tốn nhiều thời gian hơn vì nó sử dụng điện di trên gel để phân tích các sản phẩm PCR được khuếch đại. Ngược lại, PCR thời gian thực ít tốn thời gian hơn vì nó có thể phát hiện sự khuếch đại trong giai đoạn đầu của phản ứng.
• PCR thời gian thực thu thập dữ liệu ở giai đoạn tăng trưởng theo cấp số nhân của PCR trong khi PCR truyền thống thu thập dữ liệu tại Điểm cuối của phản ứng.
• Kết quả điểm cuối của PCR thông thường có thể không chính xác lắm, nhưng kết quả của PCR thời gian thực rất chính xác.
• PCR thời gian thực nhạy hơn PCR thông thường.
• PCR thông thường có độ phân giải rất kém trong khi PCR thời gian thực có thể phát hiện rất ít thay đổi do độ phân giải cao.
• Phát hiện điểm cuối của PCR thông thường có dải động ngắn trong khi phát hiện PCR thời gian thực có dải động rộng.
• Không giống như PCR thông thường, kỹ thuật phát hiện tự động được tìm thấy trong PCR thời gian thực.
• PCR thông thường rất phức tạp và tốn nhiều công sức hơn PCR thời gian thực.
• Không giống như PCR thời gian thực, PCR thông thường không thể phân biệt vi khuẩn sống và chết.
• PCR thời gian thực sử dụng hệ thống nhuộm huỳnh quang để phát hiện các sản phẩm trong khi PCR thông thường sử dụng ethidium bromide và tia UV để hình dung các dải trong môi trường gel agarose.
