Sự khác biệt chính - Trang SDS so với Western Blot
Western blotting là một kỹ thuật phát hiện một loại protein cụ thể từ một mẫu protein. Kỹ thuật này được thực hiện qua một số bước chính: điện di trên gel, thấm và lai. Điện di trên gel polyacrylamide natri dodecyl sulfat (Trang SDS) là một loại kỹ thuật điện di trên gel được sử dụng để tách các protein theo kích thước (trọng lượng phân tử) của chúng. Western blot là một tấm đặc biệt của màng thấm được sử dụng để chuyển cùng một mẫu của các protein trong Trang SDS. Sự khác biệt chính giữa SDS Page và western blot là SDS Page cho phép tách các protein trong một hỗn hợp trong khi Western blot cho phép phát hiện và định lượng một loại protein cụ thể từ một hỗn hợp. Cả hai đều hữu ích trong các nghiên cứu phân tích protein.
Trang SDS là gì?
SDS Page là kỹ thuật điện di trên gel dùng để tách protein. Nó thường được sử dụng trong hóa sinh, di truyền học, pháp y và sinh học phân tử. Khi các protein được chiết xuất từ mẫu, chúng được chạy trên gel tạo thành từ SDS và polyacrylamide. SDS là chất tẩy rửa anion được sử dụng để tuyến tính hóa protein (protein biến tính) và truyền điện tích âm cho các protein tuyến tính hóa tỷ lệ với khối lượng phân tử của chúng. Polyacrylamide trở thành giá đỡ vững chắc cho gel. Các protein biến tính mang điện tích âm di chuyển về phía đầu dương của thiết bị qua gel. Tùy theo kích thước của các protein, tốc độ di chuyển khác nhau giữa các protein và sự phân tách xảy ra. Do đó, trang SDS rất hữu ích cho việc phân tách các protein riêng lẻ dựa trên kích thước của chúng.
Việc chuẩn bị gel polyacrylamide để phân đoạn protein là một bước quan trọng trong Trang SDS. Nồng độ chính xác của polyacrylamide và loại chất liên kết ngang được sử dụng ảnh hưởng mạnh mẽ đến các đặc tính vật lý của gel, điều này làm cho sự phân tách thực tế của các protein khác nhau. Kích thước lỗ chân lông của gel cần được quản lý thích hợp để phân tách hiệu quả. Tuy nhiên, Trang SDS được coi là một kỹ thuật tách protein có độ phân giải cao.
SDS Kỹ thuật trang có một hạn chế lớn trong phân tích protein. Vì SDS làm biến tính protein trước khi phân tách, nó không cho phép phát hiện hoạt động của enzym, tương tác liên kết protein, đồng yếu tố protein, v.v.
Hình 01: Trang SDS
Western Blot là gì?
Kỹ thuật thấm phương Tây cho phép phát hiện một loại protein cụ thể từ hỗn hợp protein và đo lường số lượng và trọng lượng phân tử của protein. Western blot là màng được sử dụng trong quy trình thấm để có được hình ảnh phản chiếu của các mẫu protein trong gel SDS- polyacrylamide. Màng được sử dụng để thấm phương tây chủ yếu được tạo thành từ nitrocellulose hoặc polyvinylidene difluoride (PVDF). Màng với protein được chuyển có thể được sử dụng để xác định protein mong muốn. Nó yêu cầu kháng thể chất lượng cao để phát hiện protein mong muốn bằng cách lai. Kháng thể liên kết với kháng nguyên cụ thể của nó và tiết lộ sự hiện diện của kháng nguyên mong muốn là một protein.
Việc chuyển các protein từ gel polyacrylamide SDS sang vết thấm phía tây được thực hiện bằng phương pháp đốt điện. Đây là một phương pháp hiệu quả và nhanh chóng làm cho các protein điện di ra khỏi gel và đi qua màng nitrocellulose (Western blot).
Hình 02: Western Blot
Sự khác biệt giữa Trang SDS và Western Blot là gì?
Trang SDS vs Western Blot |
|
| SDS Page là kỹ thuật điện di trên gel. | Western blot là một kỹ thuật được thực hiện trên màng để phát hiện một loại protein cụ thể từ một hỗn hợp. |
| Sử dụng | |
| TrangSDS cho phép phân tách các protein theo kích thước của chúng. | Western blot cho phép chuyển các protein trên gel trang SDS mà không làm thay đổi mô hình của nó & cho phép lai với các kháng thể cụ thể. |
| Nhược điểm | |
| Biến tính protein, chi phí cao và sự hiện diện của hóa chất độc tố thần kinh là những nhược điểm của kỹ thuật này. | Kỹ thuật này tốn nhiều thời gian và cần có kinh nghiệm cá nhân tốt và các điều kiện được kiểm soát cụ thể. |
Tóm tắt - Trang SDS vs Western Blot
TrangSDS và Western blot là hai phương pháp liên quan đến phân tích protein. SDS Page cho phép dễ dàng phân tách các protein trên gel theo trọng lượng phân tử của chúng. Western blot giúp xác nhận sự hiện diện và số lượng của một protein cụ thể thông qua lai với các kháng thể cụ thể. Đây là sự khác biệt giữa Trang SDS và Western blot.
