Sự khác biệt chính - Trang SDS so với Trang gốc
SDS và trang gốc là hai loại kỹ thuật điện di trên gel polyacrylamide được sử dụng trong Sinh học phân tử. Sự khác biệt chính giữa Trang SDS và Trang gốc là loại gel polyacrylamide được sử dụng. Trong SDS Page, gel biến tính được sử dụng do đó, các phân tử được phân tách dựa trên trọng lượng phân tử của chúng. Ngược lại, trong Native Page, gel không biến tính được sử dụng. Do đó, các phân tử được phân tách dựa trên kích thước, điện tích và hình dạng của chúng.
Điện di Gel Polyacrylamide (Trang) sử dụng một loại gel được tạo ra bằng cách trùng hợp các monome acrylamide với methylene bisacrylamide. Polyacrylamide cứng hơn và bền nhiệt hơn agarose. Gel polyacrylamide có kích thước lỗ nhỏ hơn cho phép phân tách protein hiệu quả. Có hai loại thiết lập Trang chính là Trang SDS và Trang gốc. SDS Page hoặc Điện di trên gel Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide phân tách các protein dựa trên trọng lượng phân tử của chúng. Gel biến tính được sử dụng trong Trang SDS. Native Page sử dụng gel không biến tính và phân tách các protein dựa trên kích thước, điện tích và hình dạng của chúng (cấu trúc 3D).
Trang SDS là gì?
SDS Page là kỹ thuật điện di phổ biến nhất được sử dụng để tách các protein dựa trên trọng lượng phân tử của chúng. Gel được tạo ra bằng cách thêm SDS (Natri dodecyl sulfat), là một chất tẩy rửa. SDS giả các protein thành monome. SDS là một chất tẩy rửa anion. Do đó, nó bổ sung điện tích âm thuần cho các protein trong phạm vi pH rộng. Khi điện tích âm thuần được truyền lên các phân tử protein, do sự biến đổi điện tích, các cấu trúc phức tạp bị phá vỡ. Do mang điện tích âm, các protein hút về phía cực dương. Do đó, các phân tử có trọng lượng phân tử thấp hơn di chuyển nhanh hơn trên nền gel và có thể được quan sát gần cực dương, trong khi các protein có trọng lượng phân tử cao hơn được quan sát gần giếng hơn.
Hình 01: Trang SDS
Liên kết SDS với chuỗi polypeptit tỷ lệ với khối lượng phân tử tương đối của nó. Do đó, khối lượng phân tử cũng có thể được xác định thông qua Trang SDS. Việc nhuộm gel Trang SDS được thực hiện bằng phương pháp nhuộm xanh bromophenol. Các ứng dụng của phạm vi trang SDS ở một mức độ lớn hơn, nơi nó có thể được sử dụng để ước tính khối lượng phân tử tương đối và xác định sự phong phú tương đối của protein trong hỗn hợp protein. SDS Page cũng có thể được sử dụng để xác định sự phân bố protein trong hỗn hợp các protein. SDS Page cũng được áp dụng để tinh chế và đánh giá protein. Nó được sử dụng như một quy trình sơ bộ cho quá trình lai tây và lai, sau đó được sử dụng để lập bản đồ và xác định protein.
Trang gốc là gì?
Điện di trên gel Polyacrylamide bản địa (Native Page) sử dụng gel không biến tính. Do đó, SDS hoặc bất kỳ chất biến tính nào khác không được thêm vào chất nền gel. Trong Native Page, sự phân tách của các protein dựa trên điện tích và kích thước của protein. Do đó, độ linh động của protein phụ thuộc vào điện tích và kích thước của protein.
Điện tích của protein phụ thuộc vào các chuỗi bên của axit amin. Nếu các chuỗi bên mang điện tích âm, protein sẽ nhận tổng điện tích âm và ngược lại. Protein giữ lại hình dạng 3D do quá trình gấp diễn ra. Sự gấp là kết quả của một số loại liên kết trong protein như liên kết disulfua, tương tác kỵ nước và liên kết hydro. Do đó, nếu trang gốc được mang ở pH trung tính, các protein sẽ được phân tách theo hình dạng phân tử của protein. Do đó, Native Page có thể được sử dụng như một kỹ thuật nhạy cảm để phát hiện sự thay đổi điện tích hoặc cấu trúc của protein.
Ưu điểm chính của Trang gốc là protein được sử dụng để phân tích Trang có thể được phục hồi ở trạng thái ban đầu sau khi phân tích Trang, vì protein không bị xáo trộn trong quá trình này. Native Page là một kỹ thuật thông lượng tương đối cao và độ ổn định của protein được tăng lên.
Hình 02: Trang gốc
Sau khi hoàn thành quá trình chạy gel, có thể nhìn thấy gel Native Page bằng cách nhuộm với bromophenol blue hoặc bất kỳ thuốc thử nhuộm phù hợp nào khác. Các ứng dụng của Native Page bao gồm tách các protein có tính axit bao gồm glycoprotein như erythropoietin tái tổ hợp ở người hoặc xác định các protein có trong Albumin huyết thanh bò (BSA).
Điểm giống nhau giữa Trang SDS và Trang gốc là gì?
- Cả hệ thống Trang SDS và Trang gốc đều sử dụng gel polyacrylamide làm ma trận của gel.
- Cả hai đều được sử dụng để phân tách và xác định các protein.
- Cả hai đều sử dụng tính linh động điện di để phân tách các hợp chất.
- Cả hai đều có thể được thực hiện theo cách dọc hoặc theo cách ngang (chủ yếu được thực hiện dưới dạng thiết lập Trang dọc vì thời lượng chạy nhiều hơn).
- Thiết bị điện di bao gồm bể gel, lược, nguồn điện là cần thiết cho hoạt động của cả hai kỹ thuật.
- Việc hình dung gel có thể được thực hiện bằng phương pháp nhuộm trong cả hai kỹ thuật.
Sự khác biệt giữa Trang SDS và Trang gốc là gì?
Trang SDS so với Trang gốc |
|
| Trang SDS hoặc Trang Sodium-dodecyl sulfate phân tách các protein dựa trên trọng lượng phân tử của chúng và nó sử dụng gel biến tính. | Native Page sử dụng gel không biến tính và phân tách các protein dựa trên kích thước, điện tích và hình dạng của chúng (cấu trúc 3D). |
| Loại Gel | |
| Gel biến tính được sử dụng trong trang SDS. | Một loại gel không biến tính được sử dụng trong trang gốc. |
| Sự hiện diện của SDS | |
| SDS hiện diện như một chất tẩy rửa để truyền điện tích âm trên mẫu trong trang SDS. | SDS không có trong trang gốc. |
| Cơ sở phân tách | |
| Việc phân tách các protein phụ thuộc vào trọng lượng phân tử của protein trong trang SDS. | Sự phân tách phụ thuộc vào kích thước và hình dạng của phân tử protein trong trang gốc. |
| Tính ổn định của Protein | |
| Tính ổn định của protein thấp trong trang SDS. | Độ ổn định của protein cao trong trang gốc. |
| Phục hồi Protein ban đầu | |
| Không thể vì nó bị biến tính trong trang SDS. | Có thể có trên trang gốc. |
Tóm tắt - Trang SDS so với Trang gốc
SDS Page và Native Page là hai loại kỹ thuật điện di trên gel Polyacrylamide được sử dụng để tách protein. Trang SDS được xử lý bằng chất tẩy rửa có tên là SDS. SDS truyền một điện tích âm tổng thể cho protein, sau đó dẫn đến sự biến tính của protein. Do đó, các protein được phân tách dựa trên trọng lượng phân tử của chúng. Ngược lại, kỹ thuật Native Page không sử dụng bất kỳ tác nhân biến tính nào. Do đó, các protein được phân tách dựa trên kích thước hoặc hình dạng của chúng. Đây là sự khác biệt giữa trang SDS và trang gốc.
