Sự khác biệt chính giữa lấy nét sắc ký và lấy nét đẳng điện là lấy nét sắc ký là một loại phương pháp sắc ký cột sử dụng nhựa trao đổi ion trong khi lấy nét đẳng điện là một loại kỹ thuật điện di sử dụng gel gradient pH cố định.
Lấy nét sắc độ và lấy nét đẳng điện là hai kỹ thuật phân tách các protein theo điểm đẳng điện của chúng. Cả lấy nét sắc độ và lấy nét đẳng điện đều có khả năng phân giải lớn. Lấy nét bằng sắc ký là một phương pháp sắc ký cột có độ phân giải cao trong khi lấy nét đẳng điện là một phương pháp tách điện di. Hơn nữa, lấy nét bằng sắc độ không sử dụng điện trường trong khi lấy nét đẳng điện cần điện trường.
Lấy nét bằng sắc độ là gì?
Chromatofocusing là một loại sắc ký rửa giải cao phân tách các protein theo sự khác biệt về điểm đẳng điện của chúng. Nó sử dụng một cột nhựa trao đổi ion và một gradient pH được phát triển bên trong. Không giống như lấy nét đẳng điện, lấy nét sắc không liên quan đến điện trường. Lấy nét sắc độ là một kỹ thuật thanh lọc mạnh mẽ có thể phân giải các phân tử có độ tương đồng cao thậm chí chỉ chênh lệch nhau 0,02 đơn vị pH. Do đó, lấy nét sắc độ phù hợp nhất như là bước đánh bóng cuối cùng khi cần độ phân giải cao để tách các thành phần rất giống nhau.
Trong lấy nét sắc độ, mẫu được áp dụng cho cột bằng cách trộn nó với bộ đệm khởi động. Protein ở độ pH cao hơn điểm đẳng điện của chúng sẽ mang điện tích âm và chúng vẫn ở gần đỉnh cột trong khi các protein khác ở độ pH thấp hơn điểm đẳng điện của chúng, sẽ di chuyển xuống cột. Protein có điểm đẳng điện cao nhất được rửa giải đầu tiên trong khi protein có điểm đẳng điện thấp nhất được rửa giải cuối cùng khỏi cột. Kỹ thuật này bị ảnh hưởng bởi một số yếu tố như kết tủa protein và độ tuyến tính của gradient pH.
Lấy nét đẳng điện là gì?
Tập trung đẳng điện là một kỹ thuật phân tách các phân tử khác nhau dựa trên điểm đẳng điện của chúng. Nó còn được gọi là tập trung điện. Kỹ thuật này thường được sử dụng để tách protein trong gel. Trong tập trung đẳng điện, mẫu được thêm vào gel gradient pH cố định (IPG). Gel IPG là chất nền gel acrylamide được đồng trùng hợp với độ dốc pH. Các protein di chuyển về phía cực âm cho đến khi chúng tìm thấy vùng pH của các điểm đẳng điện của chúng. Khi một protein đạt đến độ pH không có điện tích thực, quá trình di chuyển sẽ chấm dứt và tạo ra một dải tĩnh. Tương tự như vậy, mỗi protein tạo ra một dải tại một điểm trong gradient pH tương ứng với điểm đẳng điện của nó.
Hình 01: Tập trung đẳng điện
Tập trung đẳng điện là bước đầu tiên của phương pháp điện di gel hai chiều. Trong kỹ thuật đó, đầu tiên các protein được phân tách theo điểm đẳng điện của chúng bằng cách tập trung đẳng điện và sau đó được phân tách theo trọng lượng phân tử của chúng thông qua SDS-PAGE.
Điểm giống nhau giữa Lấy nét sắc độ và Lấy nét đẳng điện là gì?
- Lấy nét bằng sắc độ và lấy nét đẳng điện là hai phương pháp có độ phân giải cao.
- Cả hai đều dựa trên điểm đẳng điện của protein.
- Những kỹ thuật này sử dụng độ dốc pH.
- Cả hai quy trình đều cung cấp thông tin để xác định đặc điểm của các biến thể hemoglobin ở người.
- Chúng có thể phân giải các phân tử mà giá trị pI chênh lệch nhau chỉ 0,02 đơn vị pH.
Sự khác biệt giữa Lấy nét bằng sắc độ và Lấy nét đẳng điện là gì?
Chromatofocusing là kỹ thuật sắc ký cột có độ phân giải cao giúp phân tách các protein theo điểm đẳng điện của chúng. Ngược lại, tập trung đẳng điện là một kỹ thuật điện di phân tách các protein theo điểm đẳng điện của chúng bằng cách áp dụng một điện trường dọc theo một gradient pH được hình thành trong một mao quản. Vì vậy, đây là sự khác biệt chính giữa lấy nét sắc độ và lấy nét đẳng điện.
Một sự khác biệt khác giữa lấy nét sắc độ và lấy nét đẳng điện là lấy nét sắc độ không liên quan đến điện trường trong khi lấy nét đẳng điện cần điện trường.
Tóm tắt - Lấy nét sắc độ so với Lấy nét đẳng điện
Lấy nét sắc độ và lấy nét đẳng điện là hai kỹ thuật tương tự nhau có khả năng phân giải các phân tử cao, đặc biệt là các phân tử rất giống nhau. Lấy nét bằng sắc ký là một kỹ thuật sắc ký cột có độ phân giải cao trong khi lấy nét đẳng điện là một phương pháp điện di. Lấy nét bằng sắc độ không liên quan đến điện trường, không giống như lấy nét đẳng điện. Do đó, điều này tóm tắt sự khác biệt giữa lấy nét sắc độ và lấy nét đẳng điện.
