Sự khác biệt giữa Blotting Bắc Nam và Western Blotting

2024 Tác giả: Alex Aldridge | [email protected]. Sửa đổi lần cuối: 2023-12-17 13:53

Sự khác biệt chính - Miền Bắc vs Miền Nam vs Miền Tây

Việc phát hiện các trình tự cụ thể của DNA, RNA và protein là điều cần thiết cho các loại nghiên cứu khác nhau trong Sinh học phân tử. Điện di trên gel là một kỹ thuật tách DNA, RNA và protein theo kích thước của chúng. Từ các cấu hình gel, trình tự DNA, trình tự RNA hoặc protein cụ thể được phát hiện bằng các kỹ thuật đặc biệt được gọi là thấm và lai với các đầu dò được đánh dấu. Có ba loại phương pháp thấm khác nhau là phương nam, phương bắc và phương tây. Sự khác biệt cơ bản giữa phương pháp thấm bắc nam và phương tây nằm ở loại phân tử mà nó phát hiện được từ một mẫu. Southern blotting là một phương pháp phát hiện một chuỗi DNA cụ thể từ một mẫu DNA. Northern blotting là một kỹ thuật phát hiện một chuỗi RNA cụ thể từ một mẫu RNA. Western blotting là một phương pháp phát hiện một loại protein cụ thể từ một mẫu protein.

Southern Blotting là gì?

Kỹ thuậtSouthern blotting được phát triển bởi E. M. Southern vào năm 1975 để xác định một trình tự DNA cụ thể từ một mẫu DNA. Đây là kỹ thuật thấm đầu tiên được giới thiệu trong sinh học phân tử. Nó cho phép phát hiện các gen cụ thể từ ADN, các đoạn cụ thể từ ADN, v.v. Có một số bước liên quan đến kỹ thuật thấm phương nam. Chúng như sau.

DNA được phân lập từ mẫu và được tiêu hóa bằng các endonuclease hạn chế.
Mẫu đã tiêu hóa được phân tách bằng phương pháp điện di trên gel Agarose.
Các đoạn DNA trong gel được biến tính thành các sợi đơn bằng cách sử dụng dung dịch kiềm.
DNA sợi đơn được chuyển đến màng lọc nitrocellulose bằng cách chuyển mao mạch.
DNA được chuyển được cố định trên màng vĩnh viễn.
DNA cố định trên màng được lai với các đầu dò được đánh dấu.
DNA không liên kết sẽ bị rửa trôi khỏi màng bằng cách rửa.
Phim X-quang được chiếu lên màng và chuẩn bị chụp ảnh tự động.

Southern blotting được áp dụng cho các khía cạnh khác nhau của sinh học phân tử. Nó hữu ích trong lập bản đồ RFLP, nghiên cứu pháp y, methyl hóa DNA trong biểu hiện gen, phát hiện gen đột biến trong các rối loạn di truyền, lấy dấu vân tay DNA, v.v.

Sự khác biệt giữa Nam Bắc và Tây Blotting - 1

Hình 01: Kỹ thuật Blotting Miền Nam

Northern Blotting là gì?

Northern blotting là một phương pháp được thiết kế để phát hiện trình tự RNA cụ thể hoặc trình tự mRNA từ một mẫu để nghiên cứu biểu hiện gen. Kỹ thuật này được phát triển bởi Alwine, Kemp và Stark vào năm 1979. Nó khác với kỹ thuật chua và thấm phương Tây do có một số bước. Tuy nhiên, kỹ thuật này cũng được thực hiện thông qua điện di trên gel, thấm và lai với các đầu dò và phát hiện được dán nhãn cụ thể. Kỹ thuật thấm miền bắc được thực hiện như sau.

RNA được chiết xuất từ mẫu và phân tách bằng điện di trên gel.
RNA được chuyển từ gel vào màng thấm và cố định.
Màng được xử lý bằng một đầu dò được đánh dấu được chuẩn bị từ cDNA hoặc RNA (đầu dò bổ sung cho một trình tự cụ thể trong mẫu).
Đầu dò được ủ với màng để liên kết với một trình tự cụ thể.
Đầu dò không gắn kết được rửa sạch.
Các mảnh ghép lai được phát hiện bằng ký tự ký.

Northern blotting là một công cụ quan trọng trong việc phát hiện và định lượng mRNA lai, nghiên cứu sự phân hủy RNA, đánh giá chu kỳ bán hủy của RNA, phát hiện nối RNA, nghiên cứu biểu hiện gen, v.v.

Sự khác biệt chính - Miền Nam, Miền Bắc và Miền Tây Blotting

Hình 02: Phương Bắc Blotting

Western Blotting là gì?

Western blotting là một phương pháp phát hiện một loại protein cụ thể từ hỗn hợp protein bằng cách sử dụng kháng thể được đánh dấu. Do đó, Western blot còn được gọi là immunoblot. Kỹ thuật này được Towbin và cộng sự giới thiệu vào năm 1979 và hiện nó được thực hiện thường xuyên trong phòng thí nghiệm để phân tích protein. Các bước thực hiện như sau.

Protein được chiết xuất từ mẫu
Protein được phân tách theo kích thước của chúng bằng phương pháp điện di trên gel polyacrylamide
Các phân tử được phân tách được chuyển vào màng PVDF hoặc màng nitrocellulose bằng cách điện phân
Màng bị chặn để liên kết không đặc hiệu với các kháng thể
Các protein được chuyển được liên kết với kháng thể chính (kháng thể đánh dấu enzym).
Màng được rửa sạch để loại bỏ các kháng thể chính liên kết không đặc hiệu
Kháng thể liên kết được phát hiện bằng cách thêm chất nền và phát hiện kết tủa màu được tạo thành

Western blotting rất hữu ích trong việc phát hiện kháng thể chống HIV trong mẫu huyết thanh người. Western blot cũng có thể được sử dụng làm xét nghiệm xác nhận nhiễm trùng Viêm gan B và xét nghiệm xác định bệnh bò điên.

Sự khác biệt giữa Blotting miền Nam, miền Bắc và miền Tây

Hình 03: Western Blotting

Sự khác biệt giữa Blotting Bắc Nam và Western Blotting là gì?

Miền Bắc vs Miền Nam vs Miền Tây
Loại phân tử được phát hiện
Northern Blotting	Northern blotting phát hiện một chuỗi RNA cụ thể từ một mẫu RNA.
Southern Blotting	Southern blotting phát hiện một chuỗi DNA cụ thể từ một mẫu DNA.
Western Blotting	Western blotting phát hiện một loại protein cụ thể từ một mẫu protein.
Loại Gel
Northern Blotting	Điều này sử dụng gel Agarose / formaldehyde.
Southern Blotting	Điều này sử dụng gel Agarose.
Western Blotting	Điều này sử dụng gel Polyacrylamide.
Phương pháp thấm
Northern Blotting	Đây là sự chuyển giao mao mạch.
Southern Blotting	Đây là sự chuyển giao mao mạch.
Western Blotting	Đây là chuyển điện.
Đầu dò được sử dụng
Northern Blotting	cDNA hoặc đầu dò RNA được gắn nhãn phóng xạ hoặc không phóng xạ.
Southern Blotting	đầu dò DNA được đánh dấu phóng xạ hoặc không phóng xạ.
Western Blotting	Kháng thể chính được sử dụng làm đầu dò.
Hệ thống phát hiện
Northern Blotting	Điều này được thực hiện bằng cách sử dụng chữ ký hoặc phát hiện ánh sáng hoặc sự thay đổi màu sắc.
Southern Blotting	Điều này được thực hiện bằng cách sử dụng chữ ký, phát hiện ánh sáng hoặc sự thay đổi màu sắc.
Western Blotting	Điều này được thực hiện bằng cách phát hiện ánh sáng hoặc sự thay đổi màu sắc.

Tổng hợp - Soi kèo Miền Bắc vs Miền Nam vs Miền Tây

Blotting là một kỹ thuật đặc biệt được phát triển để xác định DNA, RNA hoặc protein cụ thể từ các mẫu. Có ba quy trình thấm riêng biệt, đó là phía bắc, phía nam và phía tây, để phát hiện một loại phân tử cụ thể. Kỹ thuật Northern blotting được thiết kế để phát hiện một chuỗi RNA cụ thể từ hỗn hợp RNA. Kỹ thuật Southern blotting cho phép phát hiện một chuỗi DNA cụ thể từ một mẫu DNA và kỹ thuật Western blotting được phát triển để xác định một loại protein cụ thể từ hỗn hợp protein.