Sự khác biệt chính - ELISA Trực tiếp và Gián tiếp
Xét nghiệm miễn dịch liên kết enzym (ELISA), còn được gọi là xét nghiệm miễn dịch enzym, là một xét nghiệm huyết thanh học phát hiện các kháng thể trong máu. Nó được sử dụng như một công cụ chẩn đoán để tìm xem liệu bệnh nhân đã tiếp xúc với một loại vi rút cụ thể hoặc một tác nhân truyền nhiễm khác (kháng nguyên) hay không và liệu cơ thể có sản xuất kháng thể chống lại bệnh nhiễm trùng hay không. ELISA cũng có thể xác định các bệnh nhiễm trùng trong quá khứ và hiện tại. Do đó, ELISA thường được sử dụng như một xét nghiệm sàng lọc trước bởi các bác sĩ trước khi phân tích sâu về các bệnh. Xét nghiệm này có thể được thực hiện trong phòng thí nghiệm bằng cách lấy mẫu máu từ bệnh nhân. Có hai loại xét nghiệm ELISA: ELISA trực tiếp và ELISA gián tiếp. Sự khác biệt chính giữa ELISA trực tiếp và gián tiếp là ELISA gián tiếp nhạy cảm hơn và yêu cầu bổ sung kháng thể thứ cấp trong khi ELISA trực tiếp kém nhạy hơn và chỉ sử dụng một kháng thể chính.
ELISA Trực tiếp là gì?
ELISA là một xét nghiệm chẩn đoán bệnh được thực hiện để xác định sự hiện diện của các kháng nguyên hoặc kháng thể cụ thể trong máu. Nó được thực hiện như một thử nghiệm đĩa. Nó sử dụng các kháng thể liên kết với các enzym dễ dàng xét nghiệm. Sự hiện diện của kháng nguyên trong mẫu huyết thanh liên kết với các kháng thể cụ thể được liên kết với các enzym. Trong bước cuối cùng, một cơ chất cụ thể được thêm vào để phản ứng với enzym. Enzyme chuyển đổi cơ chất thành sản phẩm có màu hoặc tạo tín hiệu. Sự thay đổi màu sắc của chất nền hóa học cho thấy sự hiện diện của một loại kháng thể cụ thể trong mẫu huyết thanh. Xét nghiệm ELISA trực tiếp chỉ sử dụng một kháng thể chính được liên kết với enzym. Khi liên kết với kháng nguyên, nó nhanh chóng thay đổi màu sắc, cho thấy sự hiện diện của tác nhân lây nhiễm trong máu. Tuy nhiên, cường độ của tín hiệu yếu hơn trong ELISA trực tiếp vì các biểu mô bị giới hạn trong việc gắn các kháng nguyên. Do đó, ELISA trực tiếp kém nhạy hơn so với ELISA gián tiếp.
Hình 01: Kiểm tra ELISA Trực tiếp
ELISA Gián tiếp là gì?
ELISA có thể được thực hiện bằng cách sử dụng hai loại kháng thể cụ thể là; kháng thể chính và kháng thể thứ cấp. Công cụ ELISA gián tiếp sử dụng cả hai loại kháng thể để khuếch đại tín hiệu nhằm phát hiện tốt hơn. Kỹ thuật ELISA gián tiếp được thực hiện như sau.
- Tấm được ủ với kháng nguyên và rửa sạch để chặn sự liên kết không đặc hiệu.
- Sau đó, các kháng thể chính được thêm vào và rửa sạch.
- Kháng thể thứ cấp liên kết với enzym được thêm vào và rửa sạch.
- Một chất nền được thêm vào và cho phép phản ứng với các enzym.
- Tín hiệu được phát hiện và sự hiện diện hay vắng mặt của kháng nguyên cụ thể trong mẫu được xác định.
Trong xét nghiệm ELISA gián tiếp, một số kháng thể thứ cấp có thể liên kết với một kháng thể chính duy nhất. Các kháng thể thứ cấp được liên kết với các enzym dễ xét nghiệm. Do đó, một liên kết có thể tạo ra một tín hiệu mạnh do có nhiều hơn một tương tác. Do đó, ELISA gián tiếp nhạy hơn ELISA trực tiếp. Tuy nhiên, ELISA gián tiếp có thể tạo ra các tín hiệu không đặc hiệu do phản ứng chéo của các kháng thể thứ cấp.
Hình 02: Thử nghiệm ELISA gián tiếp
Sự khác biệt giữa ELISA Trực tiếp và Gián tiếp là gì?
ELISA Trực tiếp vs Gián tiếp |
|
| ELISA trực tiếp ít nhạy hơn so với ELISA gián tiếp. | ELISA gián tiếp nhạy hơn. |
| Thời gian đã mất | |
| Kiểm tra ELISA trực tiếp là một quá trình nhanh chóng. | ELISA gián tiếp tốn nhiều thời gian. |
| Sử dụng Kháng thể | |
| Chỉ một loại kháng thể (Kháng thể chính) được sử dụng trong ELISA trực tiếp. | Các kháng thể chính và phụ được sử dụng cho ELISA gián tiếp. |
| Liên kết với Enzyme | |
| Các kháng thể chính được liên kết với các enzym. | Các kháng thể thứ cấp được liên kết với các enzym. |
| Phản ứng chéo của các kháng thể thứ hai | |
| ELISA trực tiếp loại bỏ phản ứng chéo của các kháng thể thứ hai. | ELISA gián tiếp bị ảnh hưởng với phản ứng chéo của kháng thể thứ hai. |
| Tín hiệu | |
| Tín hiệu yếu so với ELISA gián tiếp. | Tín hiệu được khuếch đại trong ELISA gián tiếp. Do đó, rất dễ phát hiện. |
Tóm tắt - ELISA Trực tiếp vs Gián tiếp
ELISA là một kỹ thuật sinh hóa được sử dụng chủ yếu trong miễn dịch học để phát hiện sự hiện diện của kháng thể hoặc kháng nguyên trong mẫu máu của bệnh nhân. Nó có thể được thực hiện thông qua hai quá trình được gọi là ELISA trực tiếp hoặc gián tiếp. Xét nghiệm ELISA trực tiếp chỉ sử dụng kháng thể chính để phát hiện kháng nguyên trong khi ELISA gián tiếp sử dụng cả kháng thể chính và kháng thể thứ cấp. Trong ELISA trực tiếp, các kháng thể chính được đánh dấu trong khi các kháng thể thứ cấp ELISA gián tiếp được đánh dấu. Đây là sự khác biệt giữa ELISA trực tiếp và gián tiếp.
