Sự Khác Biệt Chính - YAC vs M13 Phage Vector
Nhân bản DNA là một quá trình quan trọng cho phép truyền các đoạn DNA quan trọng của sinh vật. Nó đòi hỏi sự tham gia của DNA cụ thể với DNA vectơ để tạo ra DNA tái tổ hợp biến đổi thành sinh vật chủ. Vectơ là một phân tử DNA hoạt động như một phương tiện để mang vật chất di truyền ngoại lai vào một tế bào hoặc sinh vật khác. Nó phải có khả năng sao chép bên trong cơ thể vật chủ và tạo ra nhiều bản sao của DNA tái tổ hợp. Có nhiều loại vectơ khác nhau được sử dụng trong quá trình nhân bản DNA. Nhiễm sắc thể nhân tạo của nấm men (YAC) và vectơ phage M13 là hai loại trong số đó. Sự khác biệt chính giữa vectơ thực khuẩn YAC và M13 là YAC là một nhiễm sắc thể nhân tạo sao chép trong tế bào nấm men trong khi vectơ thực khuẩn M13 là một DNA tròn sợi đơn của thực khuẩn thể M13 sao chép trong tế bào E Coli.
Vectơ YAC là gì?
YAC là một nhiễm sắc thể được xây dựng nhân tạo có khả năng mang một đoạn lớn DNA ngoại lai và sao chép trong tế bào nấm men. Nó có tâm động, telomere và các trình tự tái tạo tự động cần thiết cho sự sao chép và ổn định. YAC cũng nên có một điểm đánh dấu hoặc điểm đánh dấu và các vị trí hạn chế chọn lọc để biến nó thành một vectơ nhân bản hiệu quả. Các trình tự lớn từ 1000 kb đến 2000 kb có thể được đưa vào YAC và chuyển vào nấm men.
Hình 01: YAC Vector
Vector Phage M13 là gì?
Bacteriophage M13 là một loại virus lây nhiễm và nhân lên ở E Coli. Bộ gen của xạ khuẩn M13 có kích thước nhỏ, khoảng 6,7 kb. Nó là một DNA mạch đơn, hình tròn và có cảm giác tích cực. Virus này đặc biệt lây nhiễm vi khuẩn E Coli thông qua F pilus. Khi nó xâm nhập ssDNA vào vi khuẩn, nó sẽ tổng hợp sợi bổ sung và trở thành dsDNA hoặc dạng sao chép (RF) của M13. RF có thể hoạt động giống như một plasmid trong cơ thể vật chủ. DsDNA sao chép trong E Coli và tạo ra ssDNA mang các phage mới. Các phage mới này liên tục được giải phóng khỏi E Coli mà không giết chết tế bào chủ. Tuy nhiên, nhiễm trùng làm chậm sự phát triển của E Coli. dsDNA có thể được chiết xuất từ tế bào vi khuẩn và được sử dụng làm vectơ trong quá trình nhân bản DNA. Chúng được gọi là vectơ phage M13. Chúng có thể dễ dàng thao tác và sử dụng tương tự như vectơ plasmid.
Khả năng lây nhiễm vốn có của các phage M13 này đóng vai trò là một điều kiện tốt để được sử dụng làm vector trong nhân bản gen. Khi phát triển M13 thành một vector, một số yếu tố nên được tích hợp vào bộ gen của nó. Chúng là, một gen của protein lac repressor (lac I), vùng điều hành-gần của gen lac Z, một promoter lac và một vị trí nhân bản nhiều lần (polylinker). Khi dsDNA của M13 được sử dụng làm vectơ, nó có thể được coi là vectơ plasmid. Tuy nhiên, việc sử dụng ssDNA M13 có lợi thế trong việc xác định trình tự DNA và gây đột biến hướng vào vị trí.
Vì vectơ phage M13 có nhiều vị trí nhân bản trong vùng lacZ, các vectơ tái tổ hợp có thể dễ dàng được xác định bằng cách sàng lọc khuẩn lạc xanh / trắng trên đĩa thạch có chứa IPTG và X-Gal. Các mảng màu xanh lam được tạo ra trên các đĩa không chứa các phage tái tổ hợp. Do đó, các phage có chèn có thể được chọn cho mục đích nhân bản.
Hình 02: Bacteriophage M13
Sự khác biệt giữa YAC và M13 Phage Vector là gì?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC là một nhiễm sắc thể được biến đổi gen có khả năng mang một đoạn lớn DNA ngoại lai và sao chép trong tế bào nấm men. | Vectơ thực khuẩn thể M13 là một vectơ virut được phát triển bởi thực khuẩn thể M13 được sử dụng để chèn DNA ngoại lai vào E Coli. |
| Mục đích | |
| YAC được thiết kế để sao chép các đoạn DNA bộ gen lớn vào nấm men. | Các vectơ phageM13 được sử dụng để chèn DNA ngoại lai vào E Coli. |
| Độ dài Chèn | |
| YAC có thể chứa các chèn bộ gen có kích thước megabase (1000 kb - 2000 kb). | Kích thước của chèn khoảng 1, 500 bps. |
| Xây dựng | |
| YAC DNA rất khó để tinh sạch nguyên vẹn và đòi hỏi sự tập trung cao để tạo ra hệ thống vector YAC. | Nó xảy ra thông qua chuỗi electron quang hợp theo chu kỳ. |
| Ổn định | |
| YAC không ổn định. | M13 phage có thể được chiết xuất dễ dàng. |
| Kích thước | |
| Enzyme là những phân tử lớn hơn. | Các phageM13 ổn định hơn YAC. |
Tóm tắt - YAC vs M13 Phage Vector
YAC là một hệ thống vectơ được xây dựng nhân tạo bằng cách sử dụng một vùng cụ thể của nhiễm sắc thể nấm men để chèn các đoạn lớn vật liệu di truyền vào tế bào nấm men. Vectơ phage M13 là một hệ thống vectơ có nguồn gốc từ thực khuẩn M 13 sử dụng E coli làm sinh vật chủ. Đây là sự khác biệt chính giữa YAC và M13 Phage Vector. Cả hai đều hữu ích như nhau trong công nghệ DNA tái tổ hợp và nhân bản gen.
