Sự khác biệt chính - Gram Stain vs Acid Fast
Vi khuẩn là những vi sinh vật rất nhỏ. Chúng trong suốt và rất khó phát hiện chúng trong điều kiện sống và không được che phủ. Do đó, các phương pháp nhuộm khác nhau được phát triển để tạo điều kiện phát hiện vi khuẩn. Có ba loại kỹ thuật nhuộm chính: nhuộm đơn giản, nhuộm phân biệt và nhuộm cấu trúc. Nhuộm phân biệt là kỹ thuật sử dụng nhiều hơn một vết để phân biệt vi khuẩn. Vết bẩn Gram và vết bẩn nhanh bằng axit thường được gọi là vết bẩn khác nhau. Nhuộm Gram là một kỹ thuật nhuộm phân biệt, tách vi khuẩn thành hai nhóm được gọi là vi khuẩn Gram dương và vi khuẩn Gram âm. Vết bẩn nhanh axit là một vết bẩn phân biệt được sử dụng để xác định các sinh vật nhanh chóng axit như Mycobacterium từ các sinh vật không axit nhanh. Đây là điểm khác biệt chính giữa vết Gram và vết axit nhanh.
Gram Stain là gì?
Nhuộm Gram là một kỹ thuật nhuộm vi phân quan trọng được sử dụng để xác định vi khuẩn trong vi sinh. Kỹ thuật này được giới thiệu bởi nhà vi khuẩn học người Đan Mạch Hans Christian Gram vào năm 1884. Phương pháp nhuộm Gram phân loại vi khuẩn thành hai nhóm chính có tên là gram dương và gram âm, rất quan trọng trong việc phân loại và xác định vi khuẩn. Các nhà vi sinh học thực hiện nhuộm gram như một bước ban đầu để xác định đặc tính của vi khuẩn trong quá trình nghiên cứu của họ.
Vi khuẩn được phân nhóm dựa trên sự khác biệt trong thành tế bào của chúng. Vi khuẩn gram dương được cấu tạo bởi một lớp peptidoglycan dày trong thành tế bào của chúng trong khi vi khuẩn gram âm được cấu tạo bởi một lớp peptidoglycan mỏng trong thành tế bào của chúng. Kết quả của việc nhuộm gram sẽ dựa trên sự khác biệt về độ dày của lớp peptidoglycan của thành tế bào.
Gram nhuộm được thực hiện bằng cách sử dụng bốn loại thuốc thử khác nhau, cụ thể là; vết bẩn chính, chất tạo màu, chất khử màu và vết bẩn trên bề mặt. Màu tím pha lê và safranin được sử dụng làm chất nhuộm màu chính và chống bám màu, trong khi gam iốt và cồn 95% được sử dụng làm chất nhuộm màu và chất khử màu, tương ứng. Các bước cơ bản của vết gram như sau;
- Một vết bẩn vi khuẩn được chuẩn bị trên một lam kính sạch, được cố định nhiệt và làm lạnh.
- Smear ngập trong màu tím pha lê trong 1 - 2 phút.
- Smear được xả bằng vòi nước chảy chậm để loại bỏ các vết bẩn dư thừa.
- Gram i-ốt được bôi lên vết bẩn trong 1 phút.
- Smear được rửa sạch bằng nước máy chảy chậm
- Smear được rửa bằng cồn 95% trong 2 - 5 giây và rửa lại bằng vòi nước chảy chậm.
- Smear được nhuộm bằng safranin trong 1 phút
- Smear được rửa sạch bằng nước máy chảy chậm, làm khô và quan sát dưới kính hiển vi.
Vào cuối quá trình nhuộm gram, vi khuẩn gram âm sẽ được quan sát thấy có màu hồng trong khi vi khuẩn gram dương sẽ được quan sát có màu tím.
Hình 01: Vi khuẩn Gram âm và Gram dương
Kết quả của vết gram được quyết định bởi độ dày của lớp peptidoglycan trong thành tế bào của chúng. Trong bước khử màu, vết sơ cấp và chất nhuộm dễ dàng bị loại bỏ khỏi vi khuẩn gram âm và trở nên không màu vì chúng có một lớp peptidoglycan mỏng. Vết chính được giữ lại trong vi khuẩn gram dương vì chúng có một lớp peptidoglycan dày. Vết bẩn trên quầy sẽ không có hiệu quả đối với vi khuẩn gram dương do vết bẩn chính vẫn còn lưu lại. Do đó, vi khuẩn gram dương sẽ có thể nhìn thấy trong màu nhuộm cơ bản, tức là màu tím. Vết bẩn trên quầy sẽ làm vấy bẩn vi khuẩn gram âm, và chúng sẽ hiện rõ trong màu chọn, đó là màu safranin. Do đó, có thể dễ dàng phân loại vi khuẩn thành hai nhóm bằng cách nhuộm gram và nó có giá trị trong việc phân biệt và xác định vi khuẩn.
Axit nhanh là gì?
Tính bền axit là đặc tính vật lý của một số vi khuẩn, đặc biệt là khả năng chống khử màu của chúng đối với axit trong quá trình nhuộm màu. Sau khi nhuộm, những sinh vật này chống lại các quy trình khử màu dựa trên axit loãng và hoặc ethanol phổ biến trong nhiều quy trình nhuộm. Do đó, cái tên ‘axit nhanh’ được đặt cho những sinh vật đó. Tính chất này được thể hiện do có nhiều chất sáp (axit mycolic) trong thành tế bào của chúng. Thử nghiệm này rất quan trọng để xác định Mycobacterium tuberculosis.
Hình 2: Vi khuẩn Mycobacteria nhanh axit
Vết nhanh bằng axit này được Paul Ehrlich phát triển vào năm 1882. Kỹ thuật nhanh bằng axit của Ehrlich đã được Ziehl-Neelsen sửa đổi và hiện nay nó được sử dụng thường xuyên hơn. Quy trình nhuộm nhanh bằng axit bao gồm ba loại thuốc thử khác nhau. Carbol fuschin được sử dụng làm vết bẩn chính. Rượu axit được sử dụng làm chất khử màu. Methylene Blue được sử dụng làm chất tẩy vết ố. Quy trình nhuộm được thực hiện như sau.
- Vết chính (carbol fuchsin) được bôi lên mẫu vật cố định trên bản chiếu (Tất cả các ô sẽ được nhuộm màu đỏ).
- Tấm trượt được làm nóng bằng cách hấp trong 5 phút, giúp đẩy vết bẩn vào các tế bào một cách chính xác.
- Sau đó, dung dịch khử màu được thêm vào (Điều này loại bỏ thuốc nhuộm màu đỏ khỏi tất cả các tế bào ngoại trừ vi khuẩn nhanh axit).
- Xanh metylen được thêm vào làm chất tẩy màu (Nó tạo màu cho tất cả các tế bào vi khuẩn đã khử màu).
- Vi khuẩn nhanh chứa axit vẫn có màu đỏ trong khi vi khuẩn nhanh không có axit chuyển sang màu xanh lam.
Điểm giống nhau giữa Gram Stain và Acid Fast là gì?
- Nhuộm Gram và Acid nhanh là hai kỹ thuật nhuộm khác nhau.
- Cả hai kỹ thuật đều phân loại vi khuẩn thành hai nhóm.
- Cả hai kỹ thuật đều sử dụng hai cách nhuộm và một khử màu.
Sự khác biệt giữa Gram Stain và Acid Fast là gì?
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Nhuộm Gram là một kỹ thuật nhuộm phân biệt, phân tách vi khuẩn thành hai nhóm vi khuẩn Gram dương và vi khuẩn Gram âm. | Vết bẩn nhanh bằng axit là một vết bẩn khác biệt được sử dụng để xác định các sinh vật nhanh axit từ các sinh vật nhanh không axit. |
| Vết chính | |
| Tím pha lê là vết bẩn chính thường được sử dụng trong nhuộm gam. | Carbol fuchsin là vết bẩn chính được sử dụng trong axit nhanh. |
| Chất khử màu | |
| 95% cồn được sử dụng làm chất khử màu trong vết ố. | Rượu axit được sử dụng như một chất khử màu trong axit nhanh. |
| Vết bẩn | |
| Nhuộm Gram sử dụng safranin làm chất tẩy màu. | Vết ố nhanh bằng axit sử dụng xanh methylen làm chất tẩy vết ố. |
| Quan sát | |
| Vi khuẩn gram âm được quan sát bằng màu sắc và vi khuẩn gram dương được quan sát bằng màu tím. | Axit nhanh được quan sát thấy có màu đỏ và vi khuẩn nhanh không axit được quan sát có màu xanh lam. |
Tóm tắt - Gram Stain vs Acid Fast
Hình dung vi sinh vật ở trạng thái sống rất khó. Do đó, các quy trình nhuộm và nhuộm sinh học được sử dụng rộng rãi để nghiên cứu các đặc tính của chúng. Nhuộm phân biệt là một loại kỹ thuật nhuộm được sử dụng để phân biệt vi khuẩn. Nhuộm Gram và nhuộm nhanh axit là hai kỹ thuật nhuộm khác nhau. Nhuộm gram phân biệt vi khuẩn gram âm và vi khuẩn gram dương dựa trên độ dày của thành tế bào của chúng. Nhuộm nhanh bằng axit giúp phân biệt vi khuẩn nhanh bằng axit với vi khuẩn nhanh không axit dựa trên thành phần axit mycolic trong thành tế bào. Đây là sự khác biệt giữa axit nhanh và vết ố.
Tải xuống phiên bản PDF của Gram Stain vs Acid Fast
Bạn có thể tải xuống phiên bản PDF của bài viết này và sử dụng nó cho mục đích ngoại tuyến theo ghi chú trích dẫn. Vui lòng tải xuống phiên bản PDF tại đây Sự khác biệt giữa Vết bẩn Gram và Axit nhanh.
