Sự khác biệt chính giữa dịch mã và lấp đầy phần cuối là quá trình dịch mã là một quá trình tạo ra các đầu dò DNA được gắn nhãn cho các phản ứng lai khác nhau trong khi lấp đầy phần cuối là một kỹ thuật tạo ra các đoạn bị cùn bằng cách thêm nucleotide vào các phần nhô ra của sợi đơn.
DịchNick và điền cuối là hai kỹ thuật được sử dụng trong sinh học phân tử. Bản dịch Nick được sử dụng để đánh dấu các mẫu dò để lai nhằm phát hiện các trình tự nucleotide cụ thể. Trám cuối được sử dụng để tạo ra các mảnh bị cùn có đầu dính bằng các phần nhô ra của sợi đơn. Cả hai kỹ thuật đều có tầm quan trọng lớn và chúng được thực hiện thường xuyên trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu phân tử.
Dịch Nick là gì?
Dịch mã là một kỹ thuật quan trọng được sử dụng để chuẩn bị các đầu dò được đánh dấu cho các kỹ thuật sinh học phân tử khác nhau như thấm, lai tại chỗ, lai huỳnh quang tại chỗ, v.v … Nó là một phương pháp ghi nhãn DNA trong ống nghiệm. Đầu dò DNA được sử dụng để xác định các trình tự DNA hoặc RNA cụ thể. Với sự trợ giúp của một đầu dò được dán nhãn, các đoạn cụ thể có thể được đánh dấu hoặc hình dung từ một hỗn hợp phức tạp của axit nucleic. Do đó, các đầu dò được dán nhãn được chuẩn bị bằng nhiều kỹ thuật khác nhau. Dịch mã là một trong những phương pháp như vậy tạo ra các đầu dò được gắn nhãn với sự trợ giúp của các enzym DNase 1 và DNA polymerase 1.
Hình 01: Nick Dịch
Quá trình dịch mã bắt đầu với hoạt động của enzym DNase 1. DNase 1 đưa các khe vào xương sống của DNA sợi đôi bằng cách phân cắt các liên kết phosphodiester giữa các nucleotide. Khi nick được tạo ra, nhóm 3 ′ OH tự do của nucleotide sẽ được tạo ra, và enzyme DNA polymerase 1 sẽ hoạt động trên nó. Hoạt động exonuclease từ 5 ′ đến 3 ′ của DNA polymerase 1 loại bỏ nucleotide khỏi vị trí liên kết theo hướng 3 ′ của sợi DNA.
Đồng thời, hoạt động polymerase của enzyme DNA polymerase 1 hoạt động và bổ sung thêm nucleotide để thay thế các nucleotide đã bị loại bỏ. Nếu các nucleotide được đánh dấu, sự thay thế sẽ xảy ra bởi các nucleotide được đánh dấu và nó sẽ đánh dấu DNA để nhận dạng. Cuối cùng, DNA được đánh dấu mới được tổng hợp này có thể được sử dụng làm đầu dò trong các phản ứng lai khác nhau.
Kết thúc điền là gì?
Trám răng tận cùng là một kỹ thuật dùng trong sinh học phân tử để làm cho những mảnh vỡ bị cùn. Sự tiêu hóa hạn chế tạo ra các mảnh có phần nhô ra. Những đoạn này có thể không tương thích để liên kết thành vectơ plasmid. Các vectơ thường bị cùn để cho phép các đầu không tương thích được nối với nhau. Do đó, các đoạn có phần nhô ra có thể được làm mờ bằng cách thêm các nucleotide vào sợi bổ sung bằng cách sử dụng phần nhô ra làm khuôn cho quá trình trùng hợp. Quá trình này được gọi là làm đầy kết thúc.
DNA polymerase chẳng hạn như đoạn Klenow của DNA Polymerase I và DNA Polymerase T4 xúc tác cho quá trình lấp đầy cuối. Chúng thêm nucleotide để lấp đầy (5 ′ → 3 ′) và nhai lại (3 ′ → 5 ′). Sau khi các đầu dính được lấp đầy, chúng sẽ trở nên cùn và sẵn sàng ghép thành một vectơ.
Hơn nữa, điền vào cuối có thể được sử dụng để ghi nhãn các phân tử DNA. Tuy nhiên, nó chỉ có thể được sử dụng để đánh dấu các phân tử DNA có đầu dính. So với dịch nick, điền vào cuối là một phương pháp nhẹ nhàng hơn, hiếm khi gây ra đứt gãy DNA.
Điểm giống nhau giữa phần dịch Nick và phần điền cuối là gì?
- Cả dịch nick và điền cuối đều là kỹ thuật sinh học phân tử.
- Chúng có thể được sử dụng để gắn nhãn các đầu dò.
- Cả hai đều là trong ống nghiệm
Sự khác biệt giữa Nick Dịch và Kết thúc Điền là gì?
DịchNick là một kỹ thuật tạo ra các đầu dò được gắn nhãn để lai ghép. Ngược lại, trám bít cuối là kỹ thuật tạo ra các mảnh vỡ để thắt thành vectơ. Vì vậy, đây là điểm khác biệt chính giữa dịch nick và điền kết thúc. Hơn nữa, bản dịch của Nick yêu cầu sử dụng hoạt động exonuclease 5’đến 3 ′ trong khi điền cuối không yêu cầu hoạt động exonuclease 5’đến 3 ′.
Infographic dưới đây liệt kê sự khác biệt giữa phần dịch nick và phần điền thông tin chi tiết hơn.
Tóm tắt - Nick Dịch và Kết thúc Điền
Dịch mã là một phương pháp kết hợp các nucleotide có nhãn phóng xạ vào DNA. Nó tổng hợp các mẫu dò được đánh dấu dựa trên hoạt động của các enzym DNase 1 và E. coli DNA polymerase 1. Mặt khác, điền đầy là một kỹ thuật tạo ra các mảnh vỡ cùn. Khi các mảnh có đầu dính (phần nhô ra của sợi đơn), cần phải làm cho chúng bị cùn để liên kết thành vectơ. Sự lấp đầy cuối bổ sung các nucleotide tương thích và tạo ra các đoạn cuối cùn để làm cho chúng tương thích để thắt. Vì vậy, đây là tóm tắt sự khác biệt giữa dịch nick và điền kết thúc.
