Sự khác biệt chính giữa lọc gel và sắc ký ái lực là sắc ký lọc gel phụ thuộc vào sự khác biệt về trọng lượng phân tử hoặc kích thước của mẫu chất phân tích, trong khi sắc ký ái lực phụ thuộc vào ái lực của chất phân tích với phối tử cố định.
Thuật ngữ sắc ký trong hóa học phân tích dùng để chỉ quá trình tách các thành phần trong hỗn hợp bằng các kỹ thuật khác nhau. Sắc ký là một tên chung đại diện cho một số phương pháp khác nhau để phân tách.
Sắc ký lọc gel là gì?
Sắc ký lọc gel là một kỹ thuật phân tích trong đó sự phân tách các thành phần phụ thuộc vào sự khác biệt về trọng lượng hoặc kích thước phân tử. Kỹ thuật này còn được gọi là sắc ký loại trừ kích thước hoặc sắc ký rây phân tử. Kỹ thuật tách trong quá trình này phụ thuộc vào khả năng khác nhau của các phân tử trong mẫu đi vào các lỗ xốp của môi trường lọc gel.
Trong kỹ thuật lọc gel, pha tĩnh chứa các hạt vật liệu ngậm nước, giống như bọt biển có các lỗ có kích thước phân tử chứa một phạm vi kích thước hẹp. Nếu chúng ta cho một dung dịch nước bao gồm các phân tử có kích thước khác nhau đi qua một cột chứa các “rây phân tử” này, thì các phân tử lớn hơn các lỗ xốp của môi trường lọc sẽ di chuyển nhanh chóng qua cột. Ngược lại, các phân tử nhỏ hơn đi vào các lỗ của gel và có xu hướng di chuyển chậm qua cột. Các phân tử rửa giải khỏi cột theo thứ tự kích thước phân tử giảm dần. Ở đây, giới hạn loại trừ của gel là khối lượng phân tử của các phân tử nhỏ nhất không thể xâm nhập vào các lỗ chân lông của một loại gel nhất định.
Có nhiều loại kỹ thuật lọc gel khác nhau, chẳng hạn như phương pháp lọc gel gián tiếp, lọc gel trạng thái ổn định, thẩm tách hạt gel, v.v … Sắc ký lọc gel gián tiếp rất hữu ích trong việc xác định các hormone tuyến giáp tự do. Mặt khác, sắc ký lọc gel ở trạng thái ổn định là một kỹ thuật gián tiếp hữu ích cho phép đo các steroid tự do như cortisol, testosterone, v.v. Thẩm tách hạt gel, mặt khác, là một sửa đổi của quá trình lọc gel ở trạng thái ổn định tương đối đơn giản hơn.
Sắc ký chung sở thích là gì?
Sắc ký ái lực là một kỹ thuật phân tích và một phương pháp tách phụ thuộc vào tương tác liên kết cụ thể giữa phối tử cố định và đối tác liên kết của nó. Một số ví dụ bao gồm liên kết kháng thể-kháng nguyên, liên kết enzym-cơ chất và liên kết chất ức chế enzym. Do đó, kỹ thuật này có nhiều ứng dụng quan trọng trong tinh chế axit nucleic, tinh chế protein từ dịch chiết tế bào, và tinh chế từ máu.
Trong kỹ thuật này, thuộc tính quan trọng nhất là cố định phối tử. Chúng tôi có thể sử dụng các vật liệu khác nhau như acrylates và silica gel cho việc này. Điều quan trọng là phải ngăn chặn sự can thiệp của phân tử mục tiêu vào phối tử. Hơn nữa, một chất ức chế được gắn vào pha rắn. Chúng tôi gọi chất ức chế này là chất đệm. Về mặt cổ điển, chất đệm bao gồm một chuỗi hydrocacbon.
Pha tĩnh của sắc ký ái lực chứa lõi, chất đệm và phối tử. Đôi khi, nó cũng có một ion kim loại được ghép nối với phối tử. Pha rắn được ưa thích nhất cho pha tĩnh trong kỹ thuật này là gel agarose vì nó dễ dàng được phân phối để lấp đầy và đóng gói cột bằng các lớp nhựa có kích thước bất kỳ, và nó đủ lớn để các phân tử sinh học chảy tự do vào và xuyên qua các hạt. Các phối tử có thể gắn cộng hóa trị với polyme hạt theo nhiều cách khác nhau. Các hợp chất đệm phổ biến nhất là cyanogen bromua, epoxit, epoxit với axit C6 và diamin. Mặt khác, phối tử mà chúng ta có thể sử dụng khác nhau tùy theo mục tiêu, ví dụ: kháng thể-kháng nguyên, ion sắt hoặc nhôm-phosphoprotein, avidin-biotin, glutathione-GST, chelator-His-tag, v.v.
Sự khác biệt giữa lọc gel và sắc ký ái lực là gì?
Sắc ký là một kỹ thuật phân tích quan trọng. Sắc ký lọc gel và sắc ký ái lực là hai biến thể quan trọng của sắc ký. Sự khác biệt chính giữa lọc gel và sắc ký ái lực là sắc ký lọc gel phụ thuộc vào sự khác biệt về trọng lượng phân tử hoặc kích thước của mẫu chất phân tích, trong khi sắc ký ái lực phụ thuộc vào ái lực của chất phân tích với phối tử cố định.
Tóm tắt - Lọc Gel và Sắc ký ái lực
Có nhiều loại kỹ thuật sắc ký khác nhau tùy theo ứng dụng của chúng và bản chất của mẫu chất phân tích. Lọc gel và sắc ký ái lực là hai loại kỹ thuật như vậy. Sự khác biệt chính giữa lọc gel và sắc ký ái lực là sắc ký lọc gel phụ thuộc vào sự khác biệt về trọng lượng phân tử hoặc kích thước của mẫu chất phân tích, trong khi sắc ký ái lực phụ thuộc vào ái lực của chất phân tích với phối tử cố định.
